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zhubin0815木蟲 (小有名氣)
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[求助]
大腸桿菌掃描電鏡觀察 已有1人參與
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蟲友們，最近在做大腸桿菌培養(yǎng)與掃描電鏡觀察，樣品準(zhǔn)備步驟是從文獻上扒的（之前無基礎(chǔ) ），發(fā)現(xiàn)得到的圖片與文獻中不同 ，好像有東西未洗干凈的樣子（見附件），所以懷疑步驟有問題，求各位大神指點迷津 ，具體步驟如下：1. 用10 μL槍頭挑取菌種接種到含有20 mL的LB液體培養(yǎng)基中，在搖床中150 r/min 培養(yǎng)24 h。 2. 用接種環(huán)沾取一環(huán)的菌量，在固體培養(yǎng)基上進行劃線分離； 3. 挑取平板上出現(xiàn)的單一菌落接種到含有20 mL的LB液體培養(yǎng)基中，在搖床中150 r/min 培養(yǎng)24 h。 4. 用移液槍吸取250 μL到50 mL的LB液體培養(yǎng)基中，在搖床中150 r/min 培養(yǎng)16 h。 5. 然后用PBS緩沖液洗3次，每次離心機6000轉(zhuǎn)離心6分鐘。 6. 取20 μL稀釋后的菌液滴在潔凈的邊長為5 mm的硅片上； 7. 與37 ℃的烘箱內(nèi)干燥至半干； 8. 將處理后的載玻片置于2.5%（體積比）的戊二醛的磷鹽酸緩沖液中浸泡24小時，來對細(xì)菌進行固定； 9. 用0.1M pH7.0 PBS溶液潤洗三次（每次15 min），洗去載菌玻片上的戊二醛磷酸鹽緩沖液； 10. 放置在30%，50%，75%，85%和95%的乙醇梯度溶液中進行脫水處理；（30%乙醇→50%乙醇→75%乙醇→85%乙醇→95%乙醇，每一級15 min，再用100%的乙醇處理2次，每次20 min） 11. 脫水處理后的載菌玻片置于烘箱中37 ℃進行干燥處理。 12. 掃描電鏡噴鉑后觀察。 1.jpg 2.jpg 文獻照片.jpg |
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