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堿裂解后內(nèi)源性核酸酶會降解質(zhì)粒嗎？ 已有2人參與
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質(zhì)粒穩(wěn)定性相關(guān)文獻(xiàn)中提到“The usual procedure to avoid pDNA degradation by endogenous bacterial nucleases is to go ahead promptly with alkaline lysis”,《分子克隆》中介紹堿裂解法時也提到“從細(xì)胞中釋放DNA，去除與DNA結(jié)合的蛋白質(zhì)并快速使胞內(nèi)核酸酶失活”。 以上資料都認(rèn)為，堿裂解后需要避免內(nèi)源性核酸酶對質(zhì)粒的降解。而我的問題是，大腸桿菌中的質(zhì)粒DNA不是會被甲基化修飾從而避免被內(nèi)源性核酸酶降解嗎？因此，裂解后應(yīng)該并不需要擔(dān)心質(zhì)粒被內(nèi)源性核酸酶降解啊，而且如果質(zhì)粒會被內(nèi)源性核酸酶降解，那么裂解之前在大腸桿菌體內(nèi)豈不早就被降解光了么？ 十分期待各位蟲友的指導(dǎo)解惑，謝謝！ |
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木蟲 (正式寫手)
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2樓2020-09-23 09:24:43
junjieshao
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3樓2020-10-03 04:18:27
fuyuandj86
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【答案】應(yīng)助回帖
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辛辰昊: 金幣+35, ★★★很有幫助 2020-10-09 13:49:45
辛辰昊: 金幣+35, ★★★很有幫助 2020-10-09 13:49:45
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1.一般咱用的大腸桿菌(比如DH5a)是經(jīng)過改造的，其內(nèi)部核酸酶活性都比較低。 2.正常情況下大腸桿菌中的內(nèi)源核酸酶也是在降解質(zhì)粒的，但是降解的速度較慢，也遠(yuǎn)趕不上質(zhì)粒復(fù)制擴(kuò)增的速度。裂解以后核酸酶被釋放出來更容易降解質(zhì)粒。 3.甲基化修飾確實可以影響某些核酸酶，但是不是所有的都會受其影響。 |
4樓2020-10-04 13:31:29
5樓2020-10-05 09:27:27
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