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[求助]
拜托大佬們了，幫我看看我的條帶為什么跑成啞鈴狀，謝謝謝謝！
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各位老師們。我最近幾個(gè)月WB條帶一直跑的很難看，見(jiàn)下圖。每個(gè)泳道的條帶都是啞鈴狀，兩端信號(hào)很濃呈黑點(diǎn)，中間信號(hào)特別淡。我的目的條帶70，其他分子量的蛋白（10~100）我跑下來(lái)也是這樣，只不過(guò)沒(méi)有這么明顯（蛋白信號(hào)強(qiáng)的條帶就好很多不太看得出來(lái)）。問(wèn)了老板和師兄師姐。還是沒(méi)有找到原因。 我每次轉(zhuǎn)膜液、電泳液都是新配的，我們用millipore的PVDF膜。試了8%、10%、12%的膠都是這樣 最開(kāi)始我想是不是我蛋白和loading沒(méi)有混好，然后煮的時(shí)候特別注意混勻了，還是這樣。 然后考慮是不是膠現(xiàn)用現(xiàn)配的原因，所以我最近一次是配了之后過(guò)夜再跑的，還是這樣。 有師兄說(shuō)是膠沒(méi)配好，可我不知道哪里沒(méi)配好。。。我感覺(jué)這個(gè)坎過(guò)不去了 論壇里的各位老師們同道們，能幫我找下原因嗎？拜托拜托了 WB 問(wèn)題.png WB 問(wèn)題2.png |
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我來(lái)反饋啦，按之前大佬們說(shuō)的，1）沖洗膠孔，我就用洗瓶對(duì)準(zhǔn)膠孔，或者用槍頭伸進(jìn)孔里吹打；2）再然后配膠混勻的時(shí)候不再vortex, 而是再50mL離心管里面迅速配好之后，上下顛倒，避免劇烈搖晃起泡；3）煮蛋白的時(shí)候，loding和蛋白混勻再煮，煮完蛋白上樣前一定離心，槍頭吸樣的時(shí)候從側(cè)邊吸，避免真有沉淀被進(jìn)樣。其它操作我和之前一樣。現(xiàn)在跑膠 的啞鈴形條帶改善了非常多，基本沒(méi)有了。還有就是，10孔跑的條帶的確比15孔好看。 電泳形狀之前沒(méi)注意，現(xiàn)在到都是齊的 ps: 怎么傳圖回帖:想放現(xiàn)在的圖上來(lái)對(duì)比 |
8樓2021-05-30 11:48:25
Yuan_Gloria
新蟲(chóng) (小有名氣)
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蛋白marker條帶也是啞鈴型嗎？如果是的話，可以考慮膠的問(wèn)題，電泳時(shí)先用低電壓80V30min，再用120V60min。 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
7樓2020-11-14 18:05:18
junjieshao
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2樓2020-09-11 04:06:46
破損的黃葉
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5樓2020-11-13 06:41:48
破損的黃葉
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6樓2020-11-13 06:42:41
3樓2020-09-12 11:41:33
tanguangguo
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4樓2020-09-22 16:17:56
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9樓2021-06-23 17:37:55
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10樓2021-08-01 08:00:37
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