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[交流]
植物硝酸鹽還原酶NR的測定
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參考了各種文獻和《植物生理生化實驗技術(shù)》的提取和測定方法，但是為什么粗酶液+硝酸鉀溶液+NADH在25℃保溫30min后，檢測出空白對照組(圖左)的亞硝酸鹽濃度比總是比各類實驗組還要高？(表現(xiàn)在粉紅色深淺和吸光度) 檢測的大致過程如下: 1.新鮮葉片冷凍30min后加入1ml pH7.5磷酸緩沖液用高通量研磨機勻漿。 2.再向離心管內(nèi)補加2ml 磷酸緩沖液，混勻，用冷凍離心機4℃，17000xg離心15min。 3.取上清液0.4ml，加入0.4ml 2mg/ml的NADH和1.2ml 0.1mol/L硝酸鉀。對照組加入0.8ml磷酸緩沖液和1.2ml硝酸鉀。 4.25℃水浴保溫30min，加入0.4ml乙酸鋅，混勻后8000xg離心10min 5.上清液加入1ml 1%磺胺(含3mol/L鹽酸)和1ml 0.02%鹽酸萘乙二胺，顯色15min，540nm測吸光度 提取過程盡量都在冰水浴中完成的。實驗用的磷酸緩沖液和去離子水等都未檢測出亞硝酸鹽。硝酸鉀是新購置的藥品，理論上不應有亞硝酸鹽污染，但是對照組本身也是應當在檢測過程中作為試劑空白消去的，結(jié)果對照組的亞硝酸鹽含量比實驗組還高就非常奇怪 請問是否是實驗過程中哪里存在問題?或是什么原因?qū)е逻@樣的結(jié)果 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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