 |
 |
 |
| 24小時(shí)熱門(mén)版塊排行榜 |
- >論壇更新日志 (2931)
- >導(dǎo)師招生 (195)
- >考研 (177)
- >蟲(chóng)友互識(shí) (99)
- >文獻(xiàn)求助 (69)
- >博后之家 (65)
- >碩博家園 (53)
- >考博 (45)
- >基金申請(qǐng) (39)
- >論文投稿 (28)
- >休閑灌水 (28)
- >招聘信息布告欄 (21)
- >公派出國(guó) (19)
- >論文道賀祈福 (13)
- >標(biāo)準(zhǔn)與專利 (13)
- >找工作 (10)
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 683 | 回復(fù): 5 | |||
| 【懸賞金幣】回答本帖問(wèn)題，作者quejing26將贈(zèng)送您 100 個(gè)金幣 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
[求助]
Inverse—PCR 已有1人參與
|
|||
|
之前實(shí)驗(yàn)室一直用inversespcr定位外緣插入片段，我們是做植物，最近一個(gè)月，一直做不出來(lái)，跑膠全是空白，酶以及其他試劑幾乎換了個(gè)遍，就是不行，大家有沒(méi)有遇到類似情況，求助！ @wizardfan @biostar2009 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有194人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
|
謝謝回答，不是很會(huì)用小木蟲(chóng)，抱歉才看到，整個(gè)體系之前實(shí)驗(yàn)室做了一年，非常成熟，師兄帶我做的，后來(lái)師兄畢業(yè)了，我們是做很多獨(dú)立樣品，而且是四堿基酶，所以做一次二十多個(gè)樣品，如果成功的話不會(huì)一個(gè)也做不出來(lái)，各種試劑沒(méi)有問(wèn)題，酶和引物都用新的，循環(huán)我也用的55度，我還會(huì)進(jìn)行二次循環(huán)，用58度，最近一直在做，還是不行，有點(diǎn)氣餒了 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
5樓2020-12-24 22:26:39
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
|
首先 這類實(shí)驗(yàn)?zāi)阋欢ㄒ_定不是技術(shù)問(wèn)題， 最好的方法是 你找個(gè)做過(guò)inverse pcr的人帶你做 我以前也是做一個(gè)月做不出來(lái) 后來(lái)發(fā)現(xiàn)是酶壞了（被師弟放在室溫下太久了，變質(zhì)了）。 后來(lái)發(fā)現(xiàn)pcr cycles溫度不太對(duì)（92-55-72）。 后來(lái)發(fā)現(xiàn)跑膠的染料變質(zhì)，染不上去。 最后找個(gè)分子生物學(xué)專家?guī)兔Σ彭樌鉀Q。 你一定要找個(gè)曾經(jīng)成功過(guò)的人帶你，而且要先確認(rèn)你的所有材料都是好的，技術(shù)環(huán)節(jié)不出錯(cuò) 其次 即使技術(shù)環(huán)節(jié)不出錯(cuò)， inverse pcr這個(gè)技術(shù)本身， 也未必可以成功。 這個(gè)純粹看運(yùn)氣， 你定位插入的地方， 如果距離切割（限制性內(nèi)切酶）的地方太遠(yuǎn)， 比如2w個(gè)base pairs（有點(diǎn)夸張的比喻）， 那你肯定pcr不成。 這種情況要做full genome sequence，燒錢(qián)是唯一的辦法。 |
2樓2020-07-30 09:21:39
3樓2020-07-30 09:24:22
【答案】應(yīng)助回帖
|
首先 這類實(shí)驗(yàn)?zāi)阋欢ㄒ_定不是技術(shù)問(wèn)題， 最好的方法是 你找個(gè)做過(guò)inverse pcr的人帶你做 我以前也是做一個(gè)月做不出來(lái) 后來(lái)發(fā)現(xiàn)是酶壞了（被師弟放在室溫下太久了，變質(zhì)了）。 后來(lái)發(fā)現(xiàn)pcr cycles溫度不太對(duì)（92-55-72）。 后來(lái)發(fā)現(xiàn)跑膠的染料變質(zhì)，染不上去。 最后找個(gè)分子生物學(xué)專家?guī)兔Σ彭樌鉀Q。 你一定要找個(gè)曾經(jīng)成功過(guò)的人帶你，而且要先確認(rèn)你的所有材料都是好的，技術(shù)環(huán)節(jié)不出錯(cuò) 其次 即使技術(shù)環(huán)節(jié)不出錯(cuò)， inverse pcr這個(gè)技術(shù)本身， 也未必可以成功。 這個(gè)純粹看運(yùn)氣， 你定位插入的地方， 如果距離切割（限制性內(nèi)切酶）的地方太遠(yuǎn)， 比如2w個(gè)base pairs（有點(diǎn)夸張的比喻）， 那你肯定pcr不成。 這種情況要做full genome sequence，燒錢(qián)是唯一的辦法。 |
4樓2020-07-30 09:24:53
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
10