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absinbio
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珍貴細(xì)胞污染防不勝防？即使亡羊也需補(bǔ)牢 已有1人參與
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各位老師們培養(yǎng)細(xì)胞時想必最頭疼的就是各種污染問題，尤其是一些珍貴細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)污染后更是欲哭無淚，有時候出現(xiàn)污染但是沒有留心則會影響整個實驗進(jìn)度，所以小愛為大家掙了一下細(xì)胞培養(yǎng)出現(xiàn)的問題和處理方法，爭取讓老師們少走些彎路。 一、黑膠蟲污染 因為小愛近期收到客戶反饋實驗細(xì)胞被黑膠蟲污染導(dǎo)致實驗無法進(jìn)行，所以這邊首先解一下黑膠蟲污染，黑膠蟲屬于一種爭議生物，有人認(rèn)為是從血清中來的一種原蟲，也有人認(rèn)為是細(xì)菌，或是真菌，也有人認(rèn)為是血清中的蛋白的結(jié)晶。"黑膠蟲"可寄生于動物細(xì)胞，也可以生存于中，依靠細(xì)胞和培養(yǎng)基中的營養(yǎng)為生，并隨細(xì)胞傳代而傳代。"黑膠蟲"與細(xì)胞競爭性生長，開始時對細(xì)胞并沒有什么影響，但當(dāng)黑膠蟲的數(shù)量多到一定程度的時候， 細(xì)胞生長就會受到影響直至死亡，嚴(yán)重影響了科研活動的開展和進(jìn)行。老師們?nèi)绻龅脚囵B(yǎng)基中被黑膠蟲污染可以選擇專門的除黑膠蟲培養(yǎng)基來改善。 二、細(xì)菌污染 細(xì)菌污染是最常見的細(xì)胞污染，一旦實驗環(huán)境殺菌處理不當(dāng)，很大概率會引起細(xì)胞污染，根據(jù)污染的細(xì)菌形態(tài)不同，細(xì)菌污染后顯微鏡下觀察結(jié)果也不同，其次，培養(yǎng)液發(fā)黃，變渾濁，可明顯看見培養(yǎng)皿中有細(xì)沙狀的沉淀物，時不時還有異樣氣味發(fā)出，如下圖所示，可以在培養(yǎng)基中加入抗生素處理，可以用四環(huán)素，慶大霉素，或者鏈霉素，前兩者的工作濃度是50 μg/mL;鏈霉素的工作濃度是100 μg/mL。但是，細(xì)胞自身可能會收到影響，因此預(yù)防污染是首要。 （圖片轉(zhuǎn)自生物女學(xué)霸） 三、真菌污染 真菌污染的培養(yǎng)基在早期不易觀察，到中期出現(xiàn)絲狀或絮狀物時培養(yǎng)基已經(jīng)污染嚴(yán)重，細(xì)胞基本已經(jīng)死亡，發(fā)現(xiàn)后應(yīng)立即將培養(yǎng)基處理掉，操作臺紫外殺菌消毒，培養(yǎng)皿以及相關(guān)耗材放入高壓蒸汽鍋中滅菌處理。（霉菌同真菌一樣） 四、支原體感染 培養(yǎng)液變渾濁，支原體感染細(xì)胞以后，細(xì)胞病變不很明顯，只是細(xì)胞狀態(tài)變差、生長變慢，在顯微鏡下觀察可能會有小黑點，但培養(yǎng)基一般不發(fā)生渾濁。細(xì)胞傳代以后就出現(xiàn)細(xì)胞間黑點，細(xì)胞空泡化，很多類似凋亡、壞死的細(xì)胞，最終細(xì)胞漂浮，完全死亡。此時切斷源頭為關(guān)鍵，實驗室進(jìn)行全面滅菌處理，并換用支原體清除培養(yǎng)基進(jìn)行實驗。 |
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2樓2020-07-21 13:01:19
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