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間充質(zhì)干細(xì)胞示蹤劑以及免疫調(diào)節(jié)因子
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隨著細(xì)胞生物學(xué)的進(jìn)步，細(xì)胞治療作為一種新療法或 新藥物登上歷史舞臺，其中間充質(zhì)干細(xì)胞治療難治性疾病取得了顯著進(jìn)展。間充質(zhì)干細(xì)胞能夠釋放細(xì)胞因子和外泌體，可以調(diào)控免疫系統(tǒng)、定向遷移至受損組織并起到促 進(jìn)組織損傷修復(fù)的作用，目前在腸炎、糖尿病以及移 植物抗宿主反應(yīng)等疾病的臨床治療中取得了良好效果。 目前國際上公認(rèn)的間充質(zhì)干細(xì)胞是一類具有克隆形成 能力、能夠多向分化并貼壁生長的細(xì)胞，至少具備三大分化能力，即成骨、成軟骨和成脂肪分化。間充質(zhì)干細(xì)胞廣泛分布在人體組織中，其中胎盤、臍帶是間充質(zhì)干細(xì) 胞最理想的來源，在采集過程不會對人體造成損傷，不存在倫理問題，并且獲取到的干細(xì)胞數(shù)量大。 間充質(zhì)干細(xì)胞來源越來越豐富，不同來源的間充質(zhì)干 細(xì)胞必然存在差異，早在2007年Friedman等研究發(fā)現(xiàn)骨 髓間充質(zhì)干細(xì)胞與臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子存在差異，而這些差異是否影響臨床應(yīng)用還需要深入研究。 MSCs的分離與培養(yǎng)： ▲ 目前較常用Percoll（參考：1.073g/ml）液和Ficoll(參考：1.077g/ml)液進(jìn)行密度梯度離心，這種方法分離培養(yǎng)的MSCs大小均勻，純度較高，因此被廣泛采用。 ▲ 也有貼壁篩選法、流式細(xì)胞儀分離法、免疫磁珠分離法等 常用的MSCs標(biāo)志物： MSCs缺乏特異性的表面標(biāo)志物額，目前對于MSCs的鑒定也主要是根據(jù)它的形態(tài)、功能等，且不同來源的間充質(zhì)干細(xì)胞的表面標(biāo)志物也不盡相同。但有一個(gè)共識是MSCs不表達(dá)造血細(xì)胞的表面標(biāo)志，如CD34、CD45和CD14，也不表達(dá)與人白細(xì)胞抗原識別有關(guān)的共刺激分子CD80、CD86和CD40及主要組織相容性復(fù)合物-Ⅱ類分子。 MSCs通常具有間充質(zhì)細(xì)胞的表面抗原特征及內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、肌細(xì)胞的表面抗原等，比如CD105、CD73、CD44、CD90、CD71、CD271等以及IL-1r、IL-3r、il-4r等多種生長因子和細(xì)胞因子的受體。 常用的MSCs示蹤標(biāo)記物 ▲ GFP，轉(zhuǎn)染了GFP的MSCs移植給合適的宿主后可通過熒光顯微鏡進(jìn)行追蹤，需注意自發(fā)熒光產(chǎn)生干擾。 ▲ DAPI：在免疫熒光顯示細(xì)胞核時(shí)，DAPI通�？膳cHoechst染料互換，然而DAPI卻不是活細(xì)胞的理想標(biāo)記物，因?yàn)镈API無法穿透完整的細(xì)胞膜，并且在高濃度時(shí)具有細(xì)胞毒性。 ▲ Brdu：是一種胸腺嘧啶類似物，該分子可整合入新合成的DNA中，廣泛作為細(xì)胞標(biāo)記物使用。 ▲ Edu：是一種新型的胸腺嘧啶類似物 ▲ MSCs的多向分化潛能是使用其進(jìn)行細(xì)胞治療的理論基礎(chǔ)。移植的MSCs除需保留標(biāo)記物外還應(yīng)確定某一細(xì)胞標(biāo)志物與該示蹤標(biāo)記物共定位于同一細(xì)胞內(nèi)。 MSCs的免疫調(diào)節(jié)作用與其分泌的各種因子 ▲ 免疫調(diào)節(jié)因子：HGF、TGF-B1、PGE2、IDO ▲ 趨化因子：rantes、SDF-1a、MIP-1a、MCP-1 ▲ 營養(yǎng)因子：HGF、NGF、FGF-2、PDGF-AA、PDGF-BB、EGF ▲ 血管再生因子：VEGF165、FGF-2、EGF、PDGF-AA、PDGF-BB ▲ 抑制疤痕因子：HGF、FGF-2 ▲ 抗凋亡因子：VEGF165、FGF-2、HGF |
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