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absinbio
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有過辛辛苦苦培養(yǎng)的細(xì)胞因為凍存復(fù)蘇失活的經(jīng)歷看過來
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細(xì)胞培養(yǎng)是個辛苦活，根本離不了人。新冠病毒肺炎疫情之下，不知道您實(shí)驗室里養(yǎng)的細(xì)胞可還好？ 當(dāng)然，合理運(yùn)用細(xì)胞凍存和復(fù)蘇技術(shù)可以幫助您省心度過假期。不過也有不少小伙伴向小愛哭訴，自己辛辛苦苦養(yǎng)的細(xì)胞凍存復(fù)蘇后失活，復(fù)蘇出來后活著的細(xì)胞就沒幾個了…… 辛辛苦苦好一陣、一夜回到解放前的感覺絕對不好受，那么細(xì)胞凍存復(fù)蘇后失活的原因為何呢？我們又該如何去規(guī)避呢？ 其實(shí)目前實(shí)驗室進(jìn)行細(xì)胞凍存大多采用10%DMSO或甘油+10%到20%牛血清+培養(yǎng)基作為細(xì)胞凍存液，這種非玻璃化凍存的方式，操作中我們常規(guī)會注意慢凍快融以及分階段降溫等，但是冷凍過慢則引起細(xì)胞脫水失活，冷凍稍快又容易形成冰晶，無論如何都難以徹底避免細(xì)胞損傷。 與非玻璃化凍存相對的，細(xì)胞凍存最理想的方式無疑是超快速玻璃化凍存。 玻璃化凍存利用多種冷凍保護(hù)劑聯(lián)合形成的玻璃化冷凍保護(hù)液保護(hù)懸浮細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞內(nèi)外玻璃化冷凍時，不會形成冰晶或只形成很微小的冰晶，不會對細(xì)胞膜和細(xì)胞器造成損傷。凍存細(xì)胞放-80℃冰箱24h后即可移至液氮罐長期保存。 限制細(xì)胞玻璃化凍存廣泛應(yīng)用的，主要是其需要配置較復(fù)雜的凍存液，且配方使用需經(jīng)優(yōu)化。這些煩心煩人的工作交給我們，現(xiàn)在，愛必信有心、有愛研發(fā)推出即用型無血清細(xì)胞凍存液（貨號abs9417），無需程序降溫，適用更廣泛的細(xì)胞類型，尤其對干細(xì)胞以及原代細(xì)胞有極好的凍存效果。生產(chǎn)過程嚴(yán)格執(zhí)行cGMP操作標(biāo)準(zhǔn)。 使用我們的細(xì)胞凍存液進(jìn)行凍存和復(fù)蘇操作相當(dāng)簡單。 1）細(xì)胞凍存操作方法： 選擇對數(shù)生長期的細(xì)胞凍存，有助于提高細(xì)胞復(fù)蘇存活率。 1、按照常規(guī)方法懸浮細(xì)胞或貼壁細(xì)胞收集于離心管中。 2、1000rpm-1500rpm，5min 離心，棄上清液。 3、加入適量的無血清細(xì)胞凍存液于離心管中，推薦細(xì)胞凍存濃度為 1×106 - 1×107 cells/ml。緩慢混合均勻，制成細(xì)胞懸液。 4、將離心管中的細(xì)胞混合液分裝于已標(biāo)示的冷凍保存管中。 5、將凍存細(xì)胞放入-80℃冰箱，24h后轉(zhuǎn)入移至-196℃液氮罐長期冷凍保存。 2）細(xì)胞復(fù)蘇操作方法： 1、從液氮罐取出凍存細(xì)胞，立即放入 37℃水浴鍋或其他細(xì)胞復(fù)蘇設(shè)備中，快速融化。 2、準(zhǔn)備離心管，加入 2 倍凍存細(xì)胞體積的細(xì)胞培養(yǎng)基，待凍存管中細(xì)胞完全融化后，將凍 存細(xì)胞懸液緩慢加入離心管中。 3、1200-1500rpm 5min 離心，棄上清。 4、加入適量新鮮培養(yǎng)基，使用移液管緩慢懸浮細(xì)胞，并將細(xì)胞轉(zhuǎn)染細(xì)胞培養(yǎng)皿/瓶中，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 5、24h 后觀察細(xì)胞狀態(tài)，并更換新鮮細(xì)胞培養(yǎng)液。 同時，我們也研發(fā)推出了治療級的無血清細(xì)胞凍存液abs9413，內(nèi)毒素水平遠(yuǎn)低于藥典標(biāo)準(zhǔn)，助力您的哺乳動物細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞的凍存。 如需凍存胚胎干細(xì)胞/誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（ES/iPS）更推薦使用ES/iPS細(xì)胞凍存液（abs9412）。 辛辛苦苦培養(yǎng)的細(xì)胞，再也不會“一夜回到解放前”啦！ abs9417 無血清細(xì)胞凍存液（科研級） abs9413 無血清細(xì)胞凍存液（治療級） abs9412 ES/iPS細(xì)胞凍存液 |
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