 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1135 | 回復(fù): 0 | |||
absinbio
|
[交流]
免疫組化實(shí)驗(yàn)決定成敗的那些小細(xì)節(jié)
|
|
組化作為基礎(chǔ)的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)，每個小步驟中卻包含著決定成敗的技巧，這些你都知道嗎，就讓小編總結(jié)下給到你吧。 1.固定： 最好用4%的多聚甲醛固定液。對于冰凍切片，甲醛固定有時比冰凍丙酮好;但對于不同的組織和抗原，可選用不同的固定液。 有時候商品化的抗體會有比較適合而推薦的固定液，請于購置前注意說明書。 Bouin S固定液：飽和苦味酸750ml，甲醛250ml，冰醋酸50ml，其對組織的穿透力較強(qiáng)，固定較好，結(jié)構(gòu)完整，但因偏酸，對抗原有一定損害，且組織收縮明顯，不適于組織標(biāo)本的長期保存。 PLP液：即高碘酸鈉-賴氨酸-多聚甲醛，適于固定石蠟切片。適于富含糖類組織，對超微結(jié)構(gòu)及許多抗原的抗原性保存較好。 2.組織脫水，透明：時間不能太長，否則在切片時容易碎片，切不完整。 3.切片時展片：有些組織在切片后難以在水中展開，這時可適當(dāng)?shù)卦谒屑尤霂椎我掖肌?br /> 4.烤片：60℃ 30分鐘或37℃ 過夜，溫度太高或時間太長，抗原容易丟失。 5.蠟塊及切片的保存：最好在4℃保存 6.脫片問題：Poly-L-Lysine(多聚賴氨酸)為目前免疫組化 染色工作中最常用的一種防脫片劑，6ml的多聚賴氨酸溶液可按1:10稀釋成60ml的工作液，適合于需要酶消化、微波、高溫高壓的防脫片處理。如不行，可用雙重處理(APES和Poly-L-Lysine)的切片。在以上兩種條件都行不通的情況下，可用如下方法：切片在脫蠟前，放在APES 1：50 丙酮溶液中浸泡3分鐘，晾干，即可進(jìn)行下一步。 7.滅活內(nèi)源性酶：HRP系統(tǒng)：3%雙氧水滅活;AP系統(tǒng)：3%HAc滅活。 8.暴露抗原：對于石蠟切片的免疫組化實(shí)驗(yàn) 時，必須采用高溫加熱抗原修復(fù)，這將有助于暴露抗原決定簇，從而增加免疫組化染色的強(qiáng)度(不同抗體的最佳修復(fù)液請參閱抗體說明書)。對于不同的組織，不同的抗原，不同的抗體，所采用的方法應(yīng)不一樣，可進(jìn)行熱修復(fù)、胰酶消化、既不修復(fù)也不消化。膠原還可以用胃蛋白酶消化等。 9.封閉：在山羊血清封閉，非特異性染色仍然較強(qiáng)時，可延長封閉時間或用濃縮血清封閉 10.抗體稀釋：應(yīng)遵循“現(xiàn)用現(xiàn)配”的原則，對于PBS稀釋的抗體一定要當(dāng)天使用。 11.背景高：在抗體濃度、反應(yīng)時間、反應(yīng)溫度等合適的條件下，如果背景依舊高，可采用含1‰ Tween20的PBS洗，特別是在顯色之前要多洗。 12.返藍(lán)：在蘇木素復(fù)染后，可用堿性緩沖液(如PBS)或Na2HPO4的飽和溶液返藍(lán)。 13.顯色：一定要在顯微鏡下觀察，注意控制背景。 14.在整個操作過程中，切片千萬不能干燥，否則會有非特異性染色。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
085600材料調(diào)劑 總分330
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
歡迎211本科同學(xué)，過A區(qū)國家線，A區(qū)非偏遠(yuǎn)一本，交叉學(xué)科課題組
已經(jīng)有30人回復(fù)
-
高分子化學(xué)與物理調(diào)劑
已經(jīng)有17人回復(fù)
-
化學(xué)專業(yè)調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
0703 東華大學(xué) 理學(xué)化學(xué)均過 a 線，總分 281 求調(diào)劑
已經(jīng)有11人回復(fù)
-
材料工程調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
材料學(xué)碩318求調(diào)劑
已經(jīng)有13人回復(fù)
-
08工科求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
A區(qū)一本交叉課題組，低分調(diào)劑，招收機(jī)械電子信息通信等交叉方向
已經(jīng)有40人回復(fù)
-
070300調(diào)劑一志愿南京大學(xué)化學(xué)專業(yè)，初試273分，有論文有專利有競賽，求調(diào)劑B區(qū)211
已經(jīng)有11人回復(fù)
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 absinbio 的主題更新
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研]
 高分子化學(xué)與物理調(diào)劑
+6
|
好好好1233 2026-02-28 | 17/850 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] A區(qū)一本交叉課題組，低分調(diào)劑，招收機(jī)械電子信息通信等交叉方向 +28 | lisimayy 2026-03-04 | 40/2000 |
|
|
|
[考研] 301求調(diào)劑 +6 | 朝天椒的雙馬尾 2026-03-05 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 324求調(diào)劑 +5 | wxz2 2026-03-03 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料與化工，291，求調(diào)劑 +7 | 咕嚕咕嚕123123 2026-03-05 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 江西師范大學(xué)王昆-盧章輝課題組招化學(xué)方向碩士研究生兩名 +3 | 哈哈大俠 2026-02-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿南京大學(xué)資源與環(huán)境專業(yè)283分求調(diào)劑 +3 | 追云?? 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料328求調(diào)劑 +10 | 一個蘿卜02 2026-03-03 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +7 | 曼殊2266 2026-02-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 293求調(diào)劑 +3 | 是樂渝哇 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿中科大080500總分324求調(diào)劑 +3 | jorna 2026-03-03 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 292求調(diào)劑 +9 | yhk_819 2026-02-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 復(fù)試調(diào)劑 +4 | 杰尼龜aaa 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境調(diào)劑 +8 | chenhanheng 2026-03-02 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 267求調(diào)劑 +6 | 釣魚佬as 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +7 | repeatt?t 2026-02-28 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 085600材料工程一志愿中科大總分312求調(diào)劑 +9 | 吃宵夜1 2026-02-28 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 0856化工專碩求調(diào)劑 +15 | 董boxing 2026-03-01 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 材料類求調(diào)劑 +11 | wana_kiko 2026-02-28 | 14/700 |
|
|
|
[考研]
 尋找調(diào)劑
+4
|
LYidhsjabdj 2026-02-28 | 4/200 |
|