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absinbio
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WB實(shí)驗(yàn)中的亮眼“彩虹”——預(yù)染蛋白marker 已有2人參與
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蛋白質(zhì)印跡法(免疫印跡試驗(yàn))即Western Blot，是分子生物學(xué)、生物化學(xué)和免疫遺傳學(xué)中常用的一種實(shí)驗(yàn)方法。其基本原理是通過(guò)上樣緩沖液處理，使組織或細(xì)胞樣品中的蛋白質(zhì)帶上電荷，再進(jìn)行凝膠電泳，根據(jù)不同分子量的蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中的遷移速率不同進(jìn)行區(qū)分，后將電泳分離后的細(xì)胞或組織總蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上，然后用特異性抗體檢測(cè)某特定抗原的一種蛋白質(zhì)檢測(cè)技術(shù)。現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于基因在蛋白水平的表達(dá)研究、抗體活性檢測(cè)和疾病早期診斷等多個(gè)方面。 總結(jié)起來(lái)，WB的簡(jiǎn)要步驟如下圖所示： 圖1. Western Blot簡(jiǎn)要操作步驟圖 Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠與否，除目的蛋白條帶清晰、無(wú)背景、雜帶等干擾外，分子量大小是確定目的蛋白的重要參考因素之一。如何確定蛋白的分子量大��？我們需要用到蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)（蛋白Marker）來(lái)作為丈量蛋白分子量的“尺子”。并且，蛋白Marker也是實(shí)驗(yàn)中必須的陽(yáng)性對(duì)照，Marker精確無(wú)誤，實(shí)驗(yàn)結(jié)果才有說(shuō)服力。 目前常用的蛋白Marker分為非預(yù)染蛋白Marker和預(yù)染蛋白Marker。非預(yù)染(Pre Mixed)蛋白Marker最先在實(shí)驗(yàn)室出現(xiàn)，它是幾種已知分子量并純化好的蛋白質(zhì)預(yù)混液（目標(biāo)分子量也在這個(gè)范圍內(nèi)）。因?yàn)殡娪具^(guò)程中完全看不到，要和目標(biāo)蛋白一起等到最后經(jīng)過(guò)染色脫色后才能起指示作用，無(wú)法在實(shí)驗(yàn)中起預(yù)示作用，使用起來(lái)很不方便。 為了實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)電泳動(dòng)態(tài)，預(yù)染蛋白Marker應(yīng)運(yùn)而生。預(yù)染蛋白Marker（Prestained Marker），是將標(biāo)準(zhǔn)蛋白與染料共價(jià)耦聯(lián)，在電泳過(guò)程中或者轉(zhuǎn)膜時(shí)可以肉眼直接觀察到的一種蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)顏色又分為多色預(yù)染蛋白Marker和單色預(yù)染蛋白Marker。預(yù)染蛋白Marker可以幫助我們?cè)陔娪緯r(shí)、電泳后，以及轉(zhuǎn)膜后監(jiān)測(cè)電泳情況，估計(jì)遷移率，在Western Blot轉(zhuǎn)膜以后可以直接觀察蛋白轉(zhuǎn)膜是否完全等。 好的預(yù)染蛋白Marker，最重要的兩點(diǎn)就是條帶清晰和位置準(zhǔn)確；清晰的條帶在電泳過(guò)程中，可以更好地提示我們電泳進(jìn)程，并且在轉(zhuǎn)膜后也可以作為轉(zhuǎn)膜成功與否的判斷標(biāo)準(zhǔn)；而位置準(zhǔn)確是所有marker類產(chǎn)品的必備要求，只有“尺子”刻度精確，量出的結(jié)果才真實(shí)可靠，作為確認(rèn)目的蛋白的重要參考手段之一，蛋白Marker位置準(zhǔn)確，更是重中之重。當(dāng)然，在滿足這兩個(gè)前提條件下，如果再可以滿足保存時(shí)間長(zhǎng)，不易降解，價(jià)格優(yōu)惠等優(yōu)點(diǎn)那就更好了。小編在這里為您推薦兩款愛(ài)必信的金牌預(yù)染蛋白Marker：abs922，abs924，和金標(biāo)準(zhǔn)Thermo26616分子量基本上沒(méi)有偏差，比其他公司的預(yù)染蛋白marker具有更準(zhǔn)特性。同時(shí)，條帶更為清晰銳利，上樣量少也可顯 示出清晰條帶。對(duì)比圖如下： |
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申博
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02192151 
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2樓2020-08-14 08:45:31
without_tear
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3樓2020-08-19 10:13:32
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