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[求助]
關(guān)于標簽（tag）蛋白在免疫沉淀中的應用原理，求指點迷津！ 已有2人參與
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本人接觸蛋白免疫不久，看到熱電上的關(guān)于IP的介紹，里面有一段話闡述了標簽蛋白在IP中的應用，一直都不懂，想請教各路大神，標簽蛋白在免疫沉淀中應用的原理，謝謝~ （鏈接：https://www.thermofisher.com/cn/zh/home/life-science/protein-biology/protein-biology-learning-center/protein-biology-resource-library/pierce-protein-methods/immunoprecipitation-ip.html）Snipaste_2020-06-30_00-08-03.png |
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【答案】應助回帖
感謝參與，應助指數(shù) +1
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IP是機制實驗的探討和驗證，蛋白與蛋白的相互作用結(jié)合，形成復合體調(diào)控或是引起結(jié)合表位或構(gòu)型的變化，繼而引起功能的發(fā)生或關(guān)閉，這類屬于CO-IP實驗可以達成，如果是蛋白與DNA啟動子或是RNA（可以是lncRNA、mRNA、環(huán)狀RNA等），這類屬于RIP或是ChIP實驗，至于引起標簽蛋白，進行IP實驗，可以這樣理解 1. 市場未有可直接用于IP實驗的抗體，需要在本底蛋白上融合標簽蛋白，使用標簽抗體或是熒光蛋白抗體等來曲線救國 2. 市場有對應的抗體，為進一步驗證特異結(jié)合，使用標簽抗體進行重復驗證，更細致化的說明結(jié)合和調(diào)控關(guān)系 對于標簽蛋白引起蛋白的功能，這個是有可能的，在原有蛋白的完整結(jié)構(gòu)上，附加額外的蛋白，可能會引起本身蛋白構(gòu)象的改變，如果導致功能域的改變，那該蛋白的功能會隨之變化，這也是我們用標簽蛋白一般放在5'或3'端，或是稱為C端、N端，盡量降低對本底蛋白構(gòu)象和功能的影響 |
2樓2020-06-30 09:11:35
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好的，謝謝解惑，那么在這個基礎(chǔ)上，這些tag蛋白是如何直接標靶到我要免疫沉淀的目標蛋白上的呢？另外圖中提到的標記蛋白的缺點是過表達怎么理解呢？有沒有相關(guān)介紹的經(jīng)典著作可以介紹一下，萬分感謝  發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2020-06-30 12:05:20
junjieshao
禁蟲 (小有名氣)
感謝參與，應助指數(shù) +1
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本帖內(nèi)容被屏蔽 |
4樓2020-07-01 04:57:59
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