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PCR后電泳條帶亮暗差異明顯
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大家好， 想請(qǐng)教個(gè)問題，我根據(jù)某個(gè)物種的重測(cè)序結(jié)果，想篩選引物，以篩選某個(gè)性狀。比如，兩個(gè)果實(shí)甜澀的性狀，目前篩到了某個(gè)引物，在甜味果實(shí)中應(yīng)該有這段序列，在澀味果實(shí)中，該序列理論上應(yīng)該是沒有的。。 現(xiàn)在出現(xiàn)的問題是，我用這個(gè)引物PCR后，跑瓊脂糖電泳發(fā)現(xiàn)，甜味果實(shí)DNA的PCR條帶很亮，而澀味果實(shí)DNA的PCR條帶也是有的，但是很暗很暗，兩個(gè)條帶的亮暗差異很明顯。我做了多個(gè)重復(fù)，即提了多個(gè)DNA，結(jié)果都是甜味果實(shí)PCR條帶很亮，澀味果實(shí)PCR條帶特別暗。 問題如下， 1， 我提的DNA濃度什么的基本是差不多的，可是為什么一個(gè)條帶很暗一個(gè)條帶很亮呢。。 2， 理論上應(yīng)該一個(gè)條帶有，另一個(gè)沒有條帶。目前發(fā)現(xiàn)一個(gè)條帶很暗一個(gè)條帶很亮。既然都有條帶，那這是不是說明，這個(gè)引物效果不好，不能用于篩選這個(gè)甜澀性狀？ 3，如果DNA濃度差不多，但是電泳條帶一個(gè)亮，一個(gè)暗，可以不可以說，亮條帶的那個(gè)果實(shí)的該基因表達(dá)量高，暗條帶的那個(gè)果實(shí)的該基因表達(dá)量低？ |
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3樓2020-06-29 09:39:23
zxd95
至尊木蟲 (著名寫手)
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- 專業(yè): 無機(jī)非金屬材料
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有沒有空白對(duì)照，就是不加基因組的，看看暗的條帶是不是背景值。條帶亮，可能意味著拷貝數(shù)多，暗為基因拷貝數(shù)低。由于有假基因存在的可能性。可以把條帶擴(kuò)增這一段對(duì)照基因組，來找甜和澀的差異。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2020-06-29 03:23:11
owl2010
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4樓2020-07-01 14:18:18
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