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油條vs豆?jié){新蟲 (小有名氣)
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[求助]
金納米棒修飾DNA 已有1人參與
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大家好，我最近嘗試往金納米棒上修飾巰基化DNA，利用的是低pH高鹽法修飾，從紫外上能看到260有明顯的DNA吸收峰，合成之后的產(chǎn)物也非常穩(wěn)定，多次離心都能很好地收集到產(chǎn)物（應(yīng)該不存在DNA脫落等因素）； 但是在嘗試結(jié)合互補(bǔ)鏈DNA的時候卻一直都不能夠成功（驗證方式：1. 紫外看產(chǎn)物260吸收峰無明顯變化；2.投入與修飾探針等量的互補(bǔ)鏈DNA，在結(jié)合后未發(fā)現(xiàn)上清中DNA含量變少），想請教下大家這是哪方面出問題了？ 嘗試過的影響因素：1、DNA在金納米棒上的修飾比例；2、反應(yīng)的溫度、pH等 |
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3樓2020-06-13 04:16:38
supernatural
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2樓2020-06-12 17:24:03
4樓2020-06-13 04:16:56
油條vs豆?jié){
新蟲 (小有名氣)
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謝謝建議，你的這種方法我也嘗試過，但似乎DNA雙鏈在低pH高鹽環(huán)境下容易解鏈，沒能成功把互補(bǔ)鏈留��；我后續(xù)再嘗試下直接修飾吧，就是時間相對長一點(diǎn)。 另外，想和你探討一下關(guān)于這個DNA鏈的空間位阻影響，這種位阻是不是主要是DNA鏈離金表面太近，如果我把spacer序列長度加大一點(diǎn)，是不是會一定程度消除這種影響？其實我原來已經(jīng)加了5個A了，我現(xiàn)在計劃再加一點(diǎn)，因為我的實驗這個互補(bǔ)鏈上還需要繼續(xù)加互補(bǔ)鏈，做雜交鏈反應(yīng)形成個長鏈聚合物，所以還是優(yōu)先想考慮解決這個位阻問題 |
5樓2020-06-17 10:27:06
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