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boyudud鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
小鼠MEF細(xì)胞誘導(dǎo)分化遇到問題！
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各位老師好，這是我第一次發(fā)帖！請(qǐng)多多關(guān)注！ 本人最近在做小鼠MEF原代，感染病毒誘導(dǎo)分化的實(shí)驗(yàn)。我自己通過酶消化法制作了小鼠MEF原代細(xì)胞P0，六孔板提前鋪明膠，通過慢病毒感染轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行誘導(dǎo)1-5天，后2天換一次液。但是在大約2周-3周開始，六孔板中的MEF細(xì)胞就開始成片的脫落了（如圖），因?yàn)榕囵B(yǎng)很久長(zhǎng)得非常密，形成了一個(gè)圓片形的細(xì)胞片，從周圍開始剝脫。我自己做的人原代FB細(xì)胞未出現(xiàn)過這樣的問題（邊緣也會(huì)少許剝脫，但細(xì)胞正常）。我考慮是MEF細(xì)胞死亡后成片脫落，而不是貼壁不好導(dǎo)致的死亡。因?yàn)槿绻颜T導(dǎo)培養(yǎng)14天左右的MEF消化后傳代，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞已經(jīng)全部死亡，沒有能貼壁的。另外，我這批MEF凍存再?gòu)?fù)蘇時(shí)會(huì)發(fā)現(xiàn)大量細(xì)胞死亡，但活下來的細(xì)胞長(zhǎng)的還不錯(cuò)，如圖所示。且這批原代MEF細(xì)胞形態(tài)規(guī)則、清晰，生長(zhǎng)狀態(tài)良好，增殖活力很強(qiáng)。 我目前自己的考慮是原代細(xì)胞的問題，因?yàn)楹芏辔墨I(xiàn)都有寫MEF誘導(dǎo)培養(yǎng)2周-4周的情況，而我病毒感染后的MEF未出現(xiàn)異常，表達(dá)也OK，該有的puro抗性篩選也很好，但是在長(zhǎng)期培養(yǎng)后，細(xì)胞越來越密后出現(xiàn)了死亡（每天都觀察細(xì)胞，培養(yǎng)基變黃就會(huì)提前換液，且未發(fā)現(xiàn)污染的情況）。  在此想請(qǐng)教有經(jīng)驗(yàn)的老師同學(xué)，你們有出現(xiàn)這樣的情況嗎?原因是什么？該怎么避免呢？因?yàn)槲业恼T導(dǎo)時(shí)間至少要持續(xù)2周，甚至最長(zhǎng)會(huì)到1個(gè)月。 WeChat Image_20200610142334.jpg 圖像_660.jpg 圖像_661.jpg |
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