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蟲(chóng)蟲(chóng)蟲(chóng)蟲(chóng)小新蟲(chóng) (初入文壇)
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成骨細(xì)胞誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)曝光，先睹為快！ 已有1人參與
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一、成骨細(xì)胞誘導(dǎo)介紹 培養(yǎng)器皿表面的明膠包被： 為了避免誘導(dǎo)過(guò)程中MSCs出現(xiàn)漂浮現(xiàn)象，建議對(duì)成骨誘導(dǎo)使用的培養(yǎng)器皿表面進(jìn)行明膠包被。 操作： 1、 加適量0.1%明膠到培養(yǎng)器皿中，能覆蓋整個(gè)培養(yǎng)器皿底面的量即可。 2、 搖勻液體使其覆蓋整個(gè)培養(yǎng)器皿的底面。 3、將鋪有0.1%明膠的培養(yǎng)器皿放置在超凈臺(tái)至少30min。 4、30 min后棄去明膠，待培養(yǎng)器皿晾干后，即可用于接種細(xì)胞。 另：包被明膠的培養(yǎng)器皿在無(wú)菌和明膠不蒸干的條件下，可以在4℃保存兩周。 成骨誘導(dǎo)分化操作規(guī)程： 所需材料： 1、PBS,0.25% Trypsin-EDTA 2、原代MSCs 3、成骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基 操作方法與步驟： 為了得到最好的誘導(dǎo)結(jié)果，請(qǐng)按照以下步驟操作（以六孔板為例）： 1、原代的MSCs分離后，置于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每2-3天換液或傳代。 2、建議使用低代次的MSCs（<8代，隨著傳代后代次的增加，多向潛能的能力也逐漸降低）。當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到60-80%時(shí)，用0.25%Trypsin-EDTA進(jìn)行消化進(jìn)行傳代。 3、收集細(xì)胞，按照5X103cells/cm2的細(xì)胞密度接種在預(yù)先用明膠包被的六孔板中，每孔培養(yǎng)基2ml，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 4、待細(xì)胞融合度達(dá)到60-70%，開(kāi)始誘導(dǎo)，小心棄去培養(yǎng)基，并小心沿壁加入37℃預(yù)熱的成骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基。 5、 每隔3天更換新鮮預(yù)熱過(guò)成骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基。 6、誘導(dǎo)2周后，為盡可能避免成骨細(xì)胞卷邊，脫落，每3天全換液更換為每2天半量換液，直至誘導(dǎo)出現(xiàn)大量礦化結(jié)節(jié)。 注意事項(xiàng)： 為避免成骨細(xì)胞卷邊，脫落： 1、不要長(zhǎng)時(shí)間的在培養(yǎng)箱外觀察 2、培養(yǎng)基一定要預(yù)熱 3、避免晃動(dòng)培養(yǎng)板 |
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2樓2021-09-27 15:45:04
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