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al597032982鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
點突變求助,求問關于大腸桿菌對線性質(zhì)粒的修復過程 已有1人參與
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各位大佬請問一下我把環(huán)P后的突變質(zhì)粒用DpnI消化后膠回收純化,然后直接轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中,但是測序的時候發(fā)現(xiàn)在P出的兩個末端之間插入了整數(shù)個引物的序列,一般在十個左右,按理說應該已經(jīng)除掉引物和模板碎片了,不知道為什么還會有這種情況。 PCR的引物一開始用的是反向互補的,插入現(xiàn)象很嚴重,幾乎所有陽性克隆都有插入片段;后來改用不完全互補的引物之后,稍微好了點但是也有個別的出現(xiàn)了插入,這樣看應該也不是PCR引入的啊。 另外想請問一下大腸桿菌的連接酶的工作原理,是連接任意平末端么。 謝謝大佬們 。 |
鐵桿木蟲 (著名寫手)
金蟲 (正式寫手)
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