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我太秀了銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
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| 什么是雙熒光素酶？ |
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2樓2020-05-26 14:07:45
leejsmu
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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通過(guò)構(gòu)建兩個(gè)載體（內(nèi)參+外顯） 外顯載體含主報(bào)告基因和目的基因，一般采用螢火蟲螢光素酶（Firefly）的基因序列+目的基因序列構(gòu)建 內(nèi)參載體一般是帶有海腎螢光素酶（Renilla）基因序列或者是刺蝦（Nanoluc） 將上面兩個(gè)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞內(nèi)，翻譯蛋白 然后通過(guò)添加兩種底物去檢測(cè)信號(hào)值，主報(bào)告基因信號(hào)值代表目的基因表達(dá)量，內(nèi)參信號(hào)值用作歸一化處理 大致簡(jiǎn)單原理這樣的 |
3樓2020-05-27 15:10:49
源井生物 
鐵蟲 (初入文壇)
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- 性別: GG
雙熒光素酶通常是指螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素。其中熒火蟲熒光素是從甲蟲（Photinus pyralis）中分離得到，分子量為61kDa；而海腎（Renilla）熒光素酶則是從海腎（Renilla reniformis）中分離，分子量為36kDa。這兩種酶的區(qū)別之一是他們的底物和輔因子不同：螢火蟲熒光素酶需要熒光素、氧氣、ATP和鎂離子同時(shí)存在才能發(fā)光；而海腎熒光素酶僅需要腔腸素（coelenterazine）和氧氣。螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶的區(qū)別之二是發(fā)光的顏色不同：螢火蟲熒光素酶產(chǎn)生的光顏色呈現(xiàn)黃綠色，波長(zhǎng)550-570nm；而海腎熒光素酶產(chǎn)生藍(lán)光，波長(zhǎng)480nm。正是由于這兩種酶的底物和發(fā)光顏色不同，所以在雙報(bào)告實(shí)驗(yàn)中得到廣泛應(yīng)用 |
4樓2020-05-28 13:39:54
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