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小影同學(xué)鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
關(guān)于對(duì)硝基苯酚法測(cè)定脂肪酶活性實(shí)驗(yàn)的問(wèn)題
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請(qǐng)問(wèn)哪位大佬做過(guò)這個(gè)實(shí)驗(yàn)��？我用的底物是對(duì)硝基苯基月桂酸酯，不知道不同底物之間有沒(méi)有很大的區(qū)別。 我溶解對(duì)硝基苯基月桂酸酯的方法是參照別人的文獻(xiàn)，用80mg溶于5mmol/ml的100mL乙酸鈉溶液中，加入1ml Triton X-100，水浴加熱攪拌15分鐘至溶解，后分裝放置于冰箱4℃中保存，每次用之前，底物溶液是渾濁的，要水浴加熱再冷卻至室溫才能再次溶解。但是時(shí)間長(zhǎng)了之后，第五溶液會(huì)有一點(diǎn)黃色。 然后用這個(gè)底物溶液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，無(wú)論是加酶的組還是空白組，當(dāng)把底物溶液加入的瞬間，就會(huì)立即顯示出黃色，反應(yīng)一段時(shí)間后，空白組和加酶的組還是沒(méi)有什么色差。我看有的人在小木蟲(chóng)上說(shuō)生成的4-硝基苯酚對(duì)pH比較敏感，在堿性條件下顯色比較穩(wěn)定，我又往反應(yīng)的溶液里加入碳酸鈉溶液，可是空白組和加酶組都同時(shí)顏色更黃了，依然幾乎沒(méi)有色差。 麻煩各位實(shí)驗(yàn)大神幫我看看是什么情況，我是底物的溶解辦法不對(duì)，導(dǎo)致底物很不穩(wěn)定嗎？還是有別的原因，我用的脂肪酶是L4277（Sigma），麻煩各位大神指教。 |
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2樓2020-12-08 09:45:30
Dreamliyao
新蟲(chóng) (初入文壇)
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3樓2022-12-26 02:45:13
呱呱1呱呱
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4樓2023-11-20 14:45:11
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