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XINYAO2020
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HPLC常見的8個(gè)問(wèn)題與實(shí)用對(duì)策 已有6人參與
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高效液相色譜是色譜法的一個(gè)重要分支。該方法已成為化學(xué)、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)學(xué)、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù)。以制藥領(lǐng)域?yàn)槔何覈?guó)藥典收載高效液相色譜法項(xiàng)目和數(shù)量比較表： 鑒于HPLC在全行業(yè)運(yùn)用越來(lái)越廣泛，因此每一個(gè)實(shí)驗(yàn)室分析人員都應(yīng)該熟練掌握并應(yīng)用HPLC，對(duì)于一些常見的故障分析應(yīng)該做到游刃有余，才能在運(yùn)行故障的時(shí)候即使解決問(wèn)題，提高工作效率。為此小編整理了常見HPLC故障及對(duì)策分析方案，不要錯(cuò)過(guò)哦。 1、保留時(shí)間發(fā)生漂移或快速變化原因？ 關(guān)于漂移問(wèn)題： ① 溫度控制不好，解決方法是采用恒溫裝置， 保持柱溫恒定； ② 流動(dòng)相發(fā)生變化，解決辦法是防止流動(dòng)相發(fā)生蒸發(fā)、反應(yīng)等 ； ③ 柱子未平衡好，需對(duì)柱子進(jìn)行更長(zhǎng)時(shí)間的平衡。 關(guān)于快速變化問(wèn)題 ① 流速發(fā)生變化，解決辦法是重新設(shè)定流速，使之保持穩(wěn)定； ② 泵中有氣泡，可通過(guò)排氣等操作將氣泡趕出； ③ 流動(dòng)相不合適，解決辦法為改換流動(dòng)相或使流動(dòng)相在控制室內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)混合。 2、出現(xiàn)拖尾或雙峰的原因？ ① 篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子； ② 存在干擾峰，解決辦法為使用較長(zhǎng)的柱子；改換流動(dòng)相或更換選擇性好的柱子 ； ③ 可能柱超載，減少進(jìn)樣量。 3、HPLC柱驗(yàn)收測(cè)試時(shí)柱壓過(guò)高為什么？ 柱壓過(guò)高是HPLC柱用戶最常碰到的問(wèn)題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問(wèn)題，您可按下面步驟檢查問(wèn)題的起因。 ① 拆去保護(hù)預(yù)柱，看柱壓是否還高，否則是保 護(hù)柱的問(wèn)題，若柱壓仍高，再檢查； ② 把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降， 否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查； ③ 將柱子的進(jìn)出口反過(guò)來(lái)接在儀器上，用10倍柱體積的流動(dòng)相沖洗柱子，（此時(shí)不要連接檢測(cè)器，以防固體顆粒進(jìn)入流動(dòng)池）。這時(shí)，如果柱壓仍不下 降，再檢查；只用于使用過(guò)的柱子。 ④ 更換柱子入口篩板，若柱壓下降，說(shuō)明您的溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì)，正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高，請(qǐng)與廠商聯(lián)系。一般情況下，在進(jìn)樣器與保護(hù)柱之間接一個(gè)在線過(guò)濾器便可避免柱壓過(guò)高的問(wèn)題，SGE提供的Rheodyne 7315型，過(guò)濾器就是解決這一問(wèn)題的最佳選擇。 4、為何出現(xiàn)鬼峰？ ①進(jìn)樣閥殘余峰－－每次用后用強(qiáng)溶劑清洗閥,改進(jìn)閥和樣品的清洗； ②樣品中未知物－－處理樣品； ③柱未平衡－－重新平衡柱,用流動(dòng)相作樣品溶劑（尤其是離子對(duì)色譜）； ④三氟乙酸（TFA）氧化－－每天新配,用抗氧化劑 ； ⑤水污染（反相）－－通過(guò)變化平衡時(shí)間檢查水質(zhì)量，用HPLC級(jí)的水 。 5、為何出現(xiàn)峰拖尾？ ①柱超載——降低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相 ； ②峰干擾——清潔樣品,調(diào)整流動(dòng)相； ③硅羥基作用——加三乙胺,用堿致鈍化柱,增加緩沖液或鹽的濃度降低流動(dòng)相PH值,純化樣品 ； ④柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效——更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過(guò)濾器,過(guò)濾樣品 ； ⑤柱塌陷或形成短路通道——更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件； ⑥死體積或柱外體積過(guò)大——連接點(diǎn)降至最低,對(duì)所有連接點(diǎn)作合適調(diào)整,盡可能采用細(xì)內(nèi)徑的連接管 ； ⑦柱效下降——用較低腐蝕條件,更換柱,采用保護(hù)柱。 6、除了流速外，還有哪些因素能引起壓力改變？ 改變流動(dòng)相組成和溫度；改變柱長(zhǎng)、柱內(nèi)徑和填料粒度；柱突然阻塞壓力升高（正常情況下其它條件不變柱壓都是逐漸升高的）。 7、怎樣才會(huì)使峰位發(fā)生重排？ 在分析多組分樣品時(shí)，僅改變流動(dòng)相的強(qiáng)度（組成百分比）而不改變其組成，一般僅僅改變所有組分的保留時(shí)間，不會(huì)發(fā)生峰位的重排。 下列條件改變可能發(fā)生峰位重排：流動(dòng)相中換了強(qiáng)溶劑；PH值的改變；柱填料的改變；柱溫的改變；流動(dòng)相的組成改變（如加入離子對(duì)試劑三乙基胺等）。 8、 除了在線脫氣，常用的實(shí)驗(yàn)室脫氣方式還有哪些？ 加熱回流脫氣，脫氣效果最佳，但無(wú)法保持；氦脫氣，此方法脫氣效果佳，能除去百分之九十以上的空氣，但氦氣價(jià)格太貴，所以用的不多；真空脫氣，效果僅次于氦脫氣，但脫氣過(guò)程中容易造成樣品溶液揮發(fā)損失；超聲脫氣，只能脫去約百分之三十的空氣，但在實(shí)驗(yàn)室中最常用。目前還是盡量爭(zhēng)取用在線脫氣，方便且效果好。 心邀生物依據(jù)ISO/IEC17025國(guó)際實(shí)驗(yàn)室通用準(zhǔn)則建立了質(zhì)量運(yùn)營(yíng)體系，并且CNAS資質(zhì)認(rèn)證，擁有上千平米的研發(fā)實(shí)驗(yàn)室、標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室以及中試車間，擁有光譜、色譜、液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀、電感耦合等大型精密技術(shù)設(shè)備，準(zhǔn)確數(shù)據(jù)，報(bào)告齊全。 我們心邀生物專注醫(yī)藥新動(dòng)態(tài)，給研發(fā)人員提供及時(shí)準(zhǔn)確的信息參考。還是集雜質(zhì)對(duì)照品、化合物合成、化合物活性篩選、結(jié)構(gòu)生物學(xué)、藥效學(xué)評(píng)價(jià)、藥代動(dòng)力學(xué)評(píng)價(jià)、毒理學(xué)評(píng)價(jià)、制劑研究和新藥注冊(cè)為一體的符合標(biāo)準(zhǔn)的綜合技術(shù)服務(wù)平臺(tái)。 |
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 分析問(wèn)題 | 污染物升高 |
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