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victor_u新蟲 (小有名氣)
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淺談培養(yǎng)基
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培養(yǎng)基概述及背景 培養(yǎng)基是用以培養(yǎng)各種生物的基質(zhì)或營養(yǎng)液。其中含有生物生長發(fā)育所需要的營養(yǎng)物質(zhì)、足夠能源和適宜的pH等。不同的生物、不同培養(yǎng)目的決定了培養(yǎng)基成分的差異。培養(yǎng)基的種類很多，其中根據(jù)培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)來源的不同，培養(yǎng)基大致可分為三類：即浸出液或天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基（由已知的營養(yǎng)成分配制而成）和半合成培養(yǎng)基（在合成培養(yǎng)基中添加少量天然有機物質(zhì)，活在天然培養(yǎng)基中添加一些已知化合物）。按培養(yǎng)基的物理狀態(tài)可分為兩大類：一是溶液狀態(tài)的液體培養(yǎng)基，一是固體（加瓊脂等凝固劑）培養(yǎng)基。此外，根據(jù)培養(yǎng)基的特定目的用途還可分為其他不同類型。培養(yǎng)基的各成分配好以后，都要經(jīng)過高壓滅菌才能接種。培養(yǎng)基在生命科學(xué)各個方面的研究和應(yīng)用都有著重要意義�，F(xiàn)已廣泛應(yīng)用于各類生物的培養(yǎng)，包括藻類、菌類、地衣、苔蘚、蕨類和種子植物，也包括單細(xì)胞培養(yǎng)、花藥和組織培養(yǎng)，以及動物細(xì)胞和試管羊、試管嬰兒等。 培養(yǎng)基添加物通常有以下幾類： 1. 酚紅 酚紅在培養(yǎng)基中作pH指示劑：中性為紅色，酸性為黃色，堿性為紫色。酚紅本身對生物制品質(zhì)量不會產(chǎn)生影響，可以通過純化技術(shù)去除。 2. pH 大多數(shù)細(xì)胞適宜pH7.2-7.4，偏離此范圍可能對細(xì)胞生長產(chǎn)生有害影響。但各種細(xì)胞對pH的要求也不完全相同，一般原代細(xì)胞對pH的變動耐受性較差些，無限細(xì)胞系耐受力相對更強。但總體來說，細(xì)胞耐酸性比耐堿性強一些。在配制培養(yǎng)液時，需要注意：培養(yǎng)基在經(jīng)過0.1或0.22微米的濾膜過濾后，溶液的pH還會上浮0.2左右 3. L-glutamine 對于所有的哺乳類動物細(xì)胞而言，L-glutamine（L-谷氨酰胺）是一種必須氨基酸，為培養(yǎng)細(xì)胞提供重要的能量來源。L-glutamine脫氨基后，能夠參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝�，F(xiàn)在基本上所有固體包裝的培養(yǎng)基都含有L-glutamine，而L-glutamine在液體中不穩(wěn)定，易分解，降解溫度隨保存溫度而變，L-glutamine降解后產(chǎn)生氨，會對細(xì)胞產(chǎn)生一定毒性。所以含L-glutamine的液體培養(yǎng)基一般都需要室溫保存且具有一定的保質(zhì)期。 4. GlutaMAX-I GlutaMAX-I即谷丙氨酸二肽，是L-谷氨酰胺的衍生物，其不穩(wěn)定的α-氨基用L-丙氨酸保護。一種肽酶逐漸裂解二肽，釋放L-谷氨酰胺利用。GlutaMAX-I二胎非常穩(wěn)定，即使在121℃滅菌20分子，GlutaMAX-I二肽溶液具有最小的降解，相同條件下L-谷氨酰胺幾乎完全降解。 5. 丙酮酸鈉 丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源，盡管細(xì)胞更傾向以葡萄糖作為碳源，但如果沒有葡萄糖，細(xì)胞也可以代謝丙酮酸鈉。 6. HEPES, 碳酸氫鈉-碳酸鈉 這兩種添加物主要作為溶液的緩沖體系，保證培養(yǎng)基的pH不會受環(huán)境影響產(chǎn)生迅速變化，其中HEPES一般將pH維持在6.8-8.2，碳酸氫鈉-碳酸鈉維持在9.16-10.83左右。 |
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