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victor_u新蟲 (小有名氣)
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[交流]
分子篩柱使用的幾點建議 已有2人參與
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當(dāng)分子篩柱子（凝膠過濾介質(zhì)）使用了一段時間后，可能需要清除沉淀在柱子里的蛋白質(zhì)或其他可能積聚在柱上的污染物。 如以下情況下可能需要清潔： 1. 在色譜柱的頂部可以看到一個彩色的條帶； 2. 在柱材上方和柱床表面之間出現(xiàn)空間； 3. 分離度降低； 4. 背壓顯著增加。 第二段會給出Superdex凝膠過濾介質(zhì)的詳細(xì)清潔程序。 Cleaning 1.用1個柱體積的0.5 M NaOH以25 cm / h的流量洗滌（10/300 GL為0.33 ml / min，HiLoad 16/60為0.8 ml / min，HiLoad 26/60為2.2 ml / min） 去除大多數(shù)非特異性吸附的蛋白質(zhì)。 2.用25毫升/小時的1倍柱體積的蒸餾水洗滌 3.用2倍柱體積的緩沖液以50 cm / hr的流量（10/300 GL為0.4 ml / min，HiLoad 16/60為1.6 ml / min或HiLoad 26/60為4.3 ml / min）重新平衡。 直到在A 280處監(jiān)測到基線，并且洗脫液的pH值穩(wěn)定為止。 如果緩沖液中含有去污劑，則可能需要進(jìn)一步平衡。 建議每10–20次分離后進(jìn)行常規(guī)清潔，但是清潔的頻率還取決于所應(yīng)用樣品的性質(zhì)。 Removing.severe.contamination 1.逆向流動并在室溫下以25 cm / h的線性流速洗滌。 2.先用4倍柱體積的1 M NaOH洗滌（以除去疏水蛋白或脂蛋白），再用4倍柱體積的蒸餾水洗滌。 3.用0.5柱體積的30％異丙醇洗滌，以除去脂質(zhì)和疏水性強(qiáng)的蛋白質(zhì)，然后用2柱體積的蒸餾水洗滌。 4.在開始新的分離之前，至少用5倍柱體積的緩沖液平衡柱，或直到在A 280監(jiān)測的基線和洗脫液的pH值穩(wěn)定為止。 對于極端的污染情況，請查閱產(chǎn)品隨附的說明。 在所有情況下，預(yù)防勝于治療，建議常規(guī)清潔。如果在壓力監(jiān)視器上或看到凝膠介質(zhì)表面向下移動觀察到背壓增加，請在開始清潔柱子前確認(rèn)這種情況是否由色譜柱引起。從收集器開始，依次斷開設(shè)備中的各組件，然后啟動泵，并檢查每一個斷開組件后的壓力。其中，在線過濾器堵塞是增加背壓的常見原因。在每次運行時，需要檢查儀器接通相同組件狀態(tài)下的背壓，因為背壓會隨著儀器的運行發(fā)生變化，例如在進(jìn)樣過程中或更改為其他緩沖液時。同時，始終使用過濾后的緩沖液和樣品，以減少額外的色譜柱維護(hù)需求；在運行過程中，始終使用脫氣的緩沖液，以避免在填充柱中形成氣泡；緩沖液，預(yù)裝色譜柱和樣品應(yīng)保持在同一溫度下，以防止在色譜柱中形成氣泡；使用前過濾清潔溶液，并在下一次分離之前始終用2–3倍柱體積的緩沖液重新平衡柱。 |
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2樓2020-03-16 17:07:59
ECUST_CAPF
銅蟲 (小有名氣)
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- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
3樓2020-03-25 09:25:05
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