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wkj1015銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助：纖維素酶活測定的問題 已有3人參與
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| 本人利用實驗室從醬香大曲中篩選的5株耐高溫放線菌測定纖維素酶活，所用培養(yǎng)基：CMC-Na 10g，(NH4)2SO4 4g，Na2HPO4·12H2O4.2g， KH2PO41.4g， FeSO4·7H2O 0.016g，MgSO4·7H2O 0.5g，蛋白胨3g，酵母浸出物0.162g，蒸餾水1000ml。從斜面上直接挑取少量菌種接種至100ML液體培養(yǎng)基中，在50℃，180r/min條件下，振蕩培養(yǎng)3d，經(jīng)觀察，三角瓶中培養(yǎng)基均有大量菌絲體產(chǎn)生，且有兩瓶已經(jīng)渾濁，直接吸取1ml培養(yǎng)液，50℃水浴活化5min后加入4ml0.625%CMC-Na溶液（用PH4.6的醋酸-醋酸鈉緩沖液配制，提前也在50℃水浴活化過）在50℃水浴1小時后，立即加入1ml2mol/LNaOH溶液和2mlDNS溶液，在沸水浴中處理5min后用冷水冷卻后未變色，與空白樣的顏色一致，測不出酶活。反復多次都是不可以。不知道是什么問題？求助。困惑的是觀察以CMC-Na為唯一碳源培養(yǎng)后菌株是生產(chǎn)的，而且長的還不錯，但是就測不出酶活。有高人能幫忙嗎？ |
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wkj1015
銅蟲 (初入文壇)
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biolio2009
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4樓2020-03-12 08:49:51
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