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happyaliii金蟲 (正式寫手)
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多肽合成知識 已有2人參與
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1．多肽合成的基本原理 答：多肽固相合成法是多肽合成化學(xué)的一個重大的突破。它的最大特點是不必純化中間產(chǎn)物，合成過程可以連續(xù)進行，從而為多肽合成的自動化奠定了基礎(chǔ)。目前全自動多肽的合成，基本都是固相合成。基本過程如下： 基于Fmoc化學(xué)合成，先將所要合成的目標多肽的C-端氨基酸的羧基以共價鍵形式與一個不溶性的高分子樹脂相連，然后以這一氨基酸的氨基作為多肽合成的起點，同期它的氨基酸的羧基（已經(jīng)活化）作用形成肽鍵，不斷重復(fù)這一過程，即可得到目標多肽。根據(jù)多肽的氨基酸組成不同，多肽后處理方式不同，純化方式也有差異。 2．關(guān)于Antigen Grade 多肽必須在在多肽的一端增加 Cysteine嗎？ 答：不一定，偶連的方式與偶連的活化劑和氨基酸組成有關(guān)。EDC: 通過C端 COOH連接，一般要求序列中無Glu (E), Asp (D),或an amidated C-terminus；Act. EDC Method: 通過 N端的氨基偶連，要求序列中無Lys (K) 或N端沒有被乙�；�；MBS:通過Cys的基團載體中其他 SH連接形成 S-S. 如果序列中無 Cys,就需要添加Cys基團，最好增加在N端。 3．制備多肽抗體，常用的載體有那些？如何選擇？ 答：多肽分子量很小，免疫應(yīng)答效果差,需要與載體偶連以提高免疫源性。載體大多數(shù)為高分量的蛋白質(zhì)，常用的載體有KLH (銅藍蛋白)，BSA, OVA等。KLH為首選。 ELISA測定多肽抗體效價時，有些多肽直接包板有困難，需要與BSA等偶連后再包板。 4．做免疫用的多肽多長為合適？ 答：10-15個氨基酸，當(dāng)然長一些免疫效果好一些，不過合成費用會上去。10aa以下的多肽免疫效果比較差。 5．為什么多肽抗體有時不能用于Western Blot? 答：這比較常見，Elisa一般都沒有什么問題。 6．免疫用多肽的純度要很高嗎？ 答：純度高當(dāng)然好，但是代價也高。問題是如果純度為90-95%的多肽能產(chǎn)生抗體，65-75%純度的多肽，一般也不對失敗。 7．我們合成的多肽溶解性如何？ 答：很難準確預(yù)測一個多肽的溶解性及合適的溶劑是什么。如果多肽難以溶解就認為多肽合成有問題就大錯特錯了。那么如何判斷多肽的溶解性？ 8．多肽狀態(tài)如何？如何保存儲存？ 答：我們提供的多肽是粉末狀，一般為灰白色，組成不同，多肽粉末的顏色有差異。多肽一般需要避光保存。長期保存應(yīng)保存在-20度，短期可以保存在4度。可以短時間室溫運輸。 9．多肽的量是怎么確定？ 答：一般用天平直接稱重。 |
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2樓2022-03-07 22:34:18
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3樓2022-03-08 11:29:04
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4樓2022-04-22 01:00:48
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