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信天謹(jǐn)游新蟲 (正式寫手)
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[交流]
求助，蛋白條帶跑散了怎么辦 已有1人參與
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實(shí)驗(yàn)新手，這個(gè)問題困擾了好久，感謝大家給予意見。 我跑電泳Marker 每次都沒有問題，純的蛋白跑出來也沒有問題，條帶清晰。用10%的膠，但是用表面活性劑和鹽處理過得蛋白都會(huì)跑散，也沒有條帶出來。我的目標(biāo)蛋白分子量是66K 的，但是PEG6000在水中的水化半徑為25-35K ，有什么好的辦法除去PEG嗎？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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4樓2019-12-05 08:45:22
信天謹(jǐn)游
新蟲 (正式寫手)
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- 專業(yè): 病毒學(xué)
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用過TCA 沉淀法還有硫酸銨沉淀法都會(huì)分相，丙酮沉淀法PEG會(huì)析出，還有10K 超濾膜，還有14000的透析袋都透不過PEG 。試過很多方法了，實(shí)在沒辦法了，一直卡在著。各位老師有什么建議嗎？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2019-12-03 16:55:45
信天謹(jǐn)游
新蟲 (正式寫手)
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- 專業(yè): 病毒學(xué)
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PEG可以溶于水也可以溶于乙醇，用無水乙醇900ul加100ul含PEG 的樣品，發(fā)現(xiàn)有PEG析出，可能是溶解度沒那么高吧。但是不知道此時(shí)蛋白有沒有沉淀，那我是不是可以離心之后，再用無水乙醇去沉淀一次，把沒融的PEG去除了。不知這樣是否可行，因?yàn)椴淮_定這樣的話乙醇還能否起到沉淀蛋白的作用？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2019-12-03 17:00:50
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