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shikicat新蟲 (初入文壇)
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[求助]
想問下淀粉模擬體外消化的問題 已有3人參與
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就是通過這個(gè)實(shí)驗(yàn)來測血糖生成指數(shù)，GOPOD法和DNS法都嘗試過，最后的結(jié)果始終不對(duì)； 我采用的是GOPOD法來測淀粉水解率，測試樣品是紅薯粉絲，雖然吸光度值隨著時(shí)間推移在上升，但是計(jì)算結(jié)果仍然很低，關(guān)于這點(diǎn)，我真的百思不得其解。 粉絲樣品，測出來的淀粉是74.5g/100g,因?yàn)閷?shí)驗(yàn)只用了0.1ml樣品液，按照濃度100mg/50ml來計(jì)算，每0.1ml樣品液含淀粉149微克，但是按照GOPOD法算出來的葡萄糖含量只有1~19微克左右，換算成水解率最多只有13%，用碘檢測上清液，又不呈藍(lán)色，還請(qǐng)各位大佬看看，究竟問題出在哪里？？  萬分感謝�。� 方法如下： A. 試劑配制： 混合酶液：稱量1.16g的豬胰α-淀粉酶和0.03g的糖化酶于燒杯中加水溶解，轉(zhuǎn)移至200ml容量瓶中用蒸餾水定容； 乙酸-乙酸鈉緩沖液：稱取1.64g乙酸鈉溶于水中，加入100ml容量瓶用蒸餾水定容，并調(diào)pH至5.2。 無水乙醇，葡萄糖氧化酶試劑盒； B. 步驟： 1、稱取100mg樣品置于50mL離心管中（再做兩個(gè)平行） 2、加入2mL水，沸水浴 10min糊化 3、添加13mL pH5.2的0.2mol/L的乙酸-乙酸鈉緩沖液，在37°C恒溫水浴下平衡10min； 4、再加0.2mL混合酶液（豬胰α-淀粉酶 290U/mL，糖化酶15U/mL），在37°C恒溫水浴下振蕩（轉(zhuǎn)速為150r/min）并準(zhǔn)確計(jì)時(shí)。 5、振蕩反應(yīng)0min，30min，60min，90min，120min，180min后分別取 0.1mL 上清液加入至2mL無水乙醇進(jìn)行滅酶處理， 6、用GOPOD葡萄糖試劑盒在510nm處比色測定葡萄糖含量，每個(gè)樣品平行測定3次取平均值，繪制淀粉水解曲線。 7、將3ml GOPOD的試劑加入0.1ml的樣品溶液混合，并在40-50℃孵化20Min。在510nm波長下讀取數(shù)值（和試劑空白作對(duì)比） 來源：南昌大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 《不同添加物對(duì)擠壓重組米血糖生成指數(shù)及性質(zhì)的影響》 |
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8樓2021-10-09 10:16:56
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1.紅薯粉是不是糊化過的樣品。那么是不是就不需要再糊化了。2.可以做一個(gè)單因素實(shí)驗(yàn)，看一下酶的用量，胰a-淀粉酶和糖化酶的比例，以及pH值對(duì)最后結(jié)果的影響。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2020-08-31 21:28:51
清風(fēng)不沾水
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bodea
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