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數字PCR技術復雜生物樣本中DNA/RNA絕對定量的解決方案 已有1人參與
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數字PCR技術：dPCR和qPCR(Real-time PCR)技術定量檢測DNA/RNA時抑制劑的影響對比 眾所周知，數以千種的化學物質會抑制PCR反應有作用，而生物樣本往往都會含有類似的化合物，在DNA/RNA純化時，這類化合物很難去除，所以會存在DNA/RNA樣本中。 數字PCR技術： qPCR和Crystal dPCR進行DNA/RNA定量的比較 qPCR (Real-time PCR)進行DNA/RNA定量時，基于Ct值，且依賴于分析的樣品和標準品之間的標準曲線，通過未知樣品與含有已知量核酸標準品之間的Ct值得到未知樣品的濃度。但當樣品中存在抑制劑時，標準品和樣品之間由于背景不同，所以PCR反應效率可能不同，因此定量結果將會有偏差（圖1A）。 Naica crystal dPCR進行DNA/RNA定量時，結果判讀在于通過熒光值區(qū)分微滴的陽性或陰性。即使有因抑制劑存在而導致PCR反應效率降低，仍然可以實現準確定量（圖1B）。 數字PCR技術：qPCR和Crystal dPCR對抑制劑的耐受性比較 我們在qPCR和Crystal dPCR平臺比較了存在兩種在樣品中發(fā)現的已知抑制劑對DNA定量分析的影響，分別是在土壤樣本中存在的腐殖酸和在收集的血樣中用作抗凝血劑的肝素。結果顯示，與qPCR相比，Crystal dPCR在任何較高濃度抑制劑存在的情況下，仍然可以進行準確定量（圖3）。 數字PCR技術：qPCR和Crystal dPCR反應包含PerfeCta Multiplex qPCR Toughmix，相同量的人類基因組DNA，以及測試腐殖酸抑制作用的靶向BRAF基因和測試肝素抑制作用的EGRF基因的引物和探針。所有樣品進行2次實驗，每次實驗三個重復（利用Sigmoid即S型函數擬合）。以不添加抑制劑的DNA定量為0％抑制，計算抑制百分比。 綜上所述，當對存在抑制劑的樣品進行DNA/RNA分析時，Crystal dPCR可以比qPCR的結果更為可靠。Crystal dPCR是您一直在尋找的針對含抑制劑樣本中核酸檢測和定量的最佳解決方案。 |
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2019-11-05 16:54:48, 178.38 K
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2樓2020-10-12 17:25:29
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