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YJX009863新蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
DNS試劑測(cè)定α-淀粉酶抑制劑活性 已有1人參與
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大家好，本人想測(cè)定某種物質(zhì)對(duì)α-淀粉酶的抑制作用。采用的是DNS法測(cè)定產(chǎn)物糖的方法。 我是自己提取天然產(chǎn)物，然后買(mǎi)淀粉酶，測(cè)定天然產(chǎn)物對(duì)淀粉酶的抑制作用。 根據(jù)文獻(xiàn)的步驟：精確吸取 0. 25mL的樣品 和 0. 25 mL 2mg/mL的α-淀粉酶溶液，充分混勻，在 37℃水浴中反應(yīng)10 min，然后加入0.5mL 2%可溶性淀粉液，在 37 ℃水浴中準(zhǔn)確反應(yīng) 5 min。再加入 0.5mL DNS 顯色劑，在沸水浴中反應(yīng) 6 min，之后立即用流動(dòng)自來(lái)水冷卻 (終止反應(yīng))，用PBS稀釋10倍在 540 nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸收度，記為 OD。 樣品、2%可溶性淀粉液及酶液都是用PBS配置的。3,5-二硝基水楊酸(DNS)溶液配置:精確稱取 6.3 g DNS和 262 m L 2 mol.L-1的氫氧化鈉溶液，加入含有 182 g 酒石酸鉀鈉的 500 m L 溫度為 50℃左右的熱水溶液中，再加入結(jié)晶苯酚 5 g，亞硫酸鈉 5 g，充分溶解，冷卻至常溫后加水定容到 1 L，貯存于棕色瓶中，即成 DNS 溶液，室溫下放置 7 d 后使用。 但是根據(jù)這個(gè)步驟做出來(lái)，樣品組（樣品+α-淀粉酶溶液），空白對(duì)照組（用pbs代替樣品，其他同上），煮沸6分鐘后，紅棕色顏色很深，PBS稀釋后，樣品組OD值與空白組OD值幾乎差不多，有幾次做還會(huì)比空白組高。還不知道是什么原因？ 求大神幫忙，我是試了好多還不出滿意結(jié)果，感覺(jué)奔潰了！謝謝 |
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