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[交流]
江湖救急 已有2人參與
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誒,慚愧。這個(gè)PCR折磨了我一個(gè)多月了。剛開始部分能p出來,幾個(gè)挑單克隆測(cè)序不對(duì),測(cè)序出來了3個(gè),后面再做pcr怎么p都不出來了,用什么酶都試了一遍,退火條件也試過了,都跑不出來。用基因組DNA也不行,跑出來幾個(gè),純化后連接轉(zhuǎn)化挑不出陽(yáng)性。PCR卡就算了,好幾個(gè)還都卡在陽(yáng)性挑不出來,好郁悶啊,后面覺得是引物可能設(shè)的不好,所以重設(shè)了引物,但是也就提高了退火,降低了上下游的差異在差中選優(yōu),還是沒有擴(kuò)增出來。想問問有沒有有經(jīng)驗(yàn)的,想請(qǐng)教一下,是模板的問題嗎?RNA打算重新提一下。陽(yáng)性挑不出來又該怎么調(diào)整呢,用的是重組連接酶,和這個(gè)有關(guān)系嗎? 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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提的水稻的RNA有兩條帶,第三條帶看不到。是不是不太好,濃度在1300ng左右,引物是按照infusion的要求設(shè)的除了酶切位點(diǎn)有15個(gè)堿基的模板匹配,剩余分別基因的cds兩端,推薦的退火在60℃左右 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
新蟲 (小有名氣)
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首先 你這是提什么的rna rna跑膠情況圖有嗎 引物是根據(jù)什么來設(shè)計(jì)的 推薦pcr溫度多少 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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