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蟲蟲笑了木蟲 (小有名氣)
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[求助]
陽離子交換層析洗脫問題 已有1人參與
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| 最近使用陽離子交換柱 Fractogel預(yù)裝柱純化目的蛋白，使用0-1.5M鹽進(jìn)行階段性的梯度洗脫，但是在10%，20%，30%，40%，50%梯度下均有出峰，且出峰正常，每個梯度下洗脫到基線然后才切換下一個梯度，最終電泳結(jié)果顯示各個梯度下洗脫組分中均含有目的蛋白且濃度相當(dāng)，求教這是怎么回事？難道是目的蛋白與填料的結(jié)合位點(diǎn)不同造成洗脫難度的差異所致么，如果目的蛋白與填料結(jié)合方式固定，應(yīng)該在某一個梯度下就能完全洗脫下來，現(xiàn)在在每個梯度下均有很高的出峰，且都是單峰，求賜教！�。。� |
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2樓2019-10-30 16:31:27
wolfman840
木蟲 (正式寫手)
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這個時候你就可以看一下雜蛋白位置，如果雜蛋白在低鹽度下出來，則用預(yù)洗脫分離后用步級洗脫目的蛋白。反之則用步級洗脫目的蛋白后，用CIP溶液洗下雜蛋白。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
3樓2019-10-31 08:09:01
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