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小木蟲論壇-學術(shù)科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 蛋白考染
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yuzhongbaihe新蟲 (正式寫手)
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[交流]
蛋白考染
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蛋白考染并脫色后，只發(fā)現(xiàn)maker的條帶，所有的樣品都沒有跑出條帶來(整個膠什么條帶都沒有)，連對照都沒有跑出條帶來，我這些樣品是半個月前取得樣，然后離心去上清后凍在－20℃冰箱中，先用ddH2O重懸沉淀，再加5?loading buffer混勻后，在沸水中煮樣10分鐘后，再離心2分鐘，取上清進行SDS-PAGE分析，下層膠是用的10%，先80v跑，后200v跑，我的蛋白是116kDa，請大神給分析下，到底是哪里出來問題，怎么會一條帶都跑不出來呢 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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yuzhongbaihe(myprayer代發(fā)): 金幣+5, 贈人玫瑰，手有余香，鼓勵積極發(fā)帖交流互幫互助。 2019-10-17 11:03:07
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
yuzhongbaihe(myprayer代發(fā)): 金幣+5, 贈人玫瑰，手有余香，鼓勵積極發(fā)帖交流互幫互助。 2019-10-17 11:03:07
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我有幾個建議，僅供參考：1、蛋白marker是預(yù)混裝還是現(xiàn)配的？估計是買的現(xiàn)成的，圖方便；如果是現(xiàn)配marker,那說明你的樣品有問題。2、market能跑出來，說明膠提議沒有問題，就要考慮樣品和操作過程，有沒有可能是蛋白濃度太大，在上樣口集中在一起了？我之前就遇到過這個問題，想讓條帶更大一些，濃度給的很高，結(jié)果全塞住了。3、10min會不會有點長？我一般都是3～5min,并且還有點體會，越是大分子量蛋白沸水浴時間越久存留就越少，建議時間縮短點兒。4、還有這個沸水后離心取上清不是很建議，因為這個時候蛋白已經(jīng)和上樣緩沖液混合煮沸，被高溫和SDS處理變性了，離心容易沉淀；如果有比較大的雜質(zhì)的話，取樣前離心取上清，再和上樣緩沖液混合煮沸，吸打混勻后再上樣。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
yuzhongbaihe2樓2019-10-16 00:00:17
yuzhongbaihe
新蟲 (正式寫手)
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3樓2019-10-16 00:22:18
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