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卡梅德
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重組蛋白原核表達(dá)服務(wù) 已有3人參與
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重組蛋白原核表達(dá)服務(wù) 卡梅德生物（KMDTM Bioscience）多年致力于重組蛋白表達(dá)與制備研究。我們的科學(xué)家擁有豐富的原核蛋白表達(dá)以及工業(yè)級(jí)別蛋白發(fā)酵、純化經(jīng)驗(yàn)。通過(guò)每年多達(dá)400個(gè)原核蛋白制備項(xiàng)目的技術(shù)積累，卡梅德生物（KMDTM Bioscience）設(shè)計(jì)了一套有效的包含多種融合標(biāo)簽（His，GST，SUMO，F(xiàn)LAG等標(biāo)簽）的表達(dá)載體，能夠?yàn)榭蛻?hù)可溶性表達(dá)超過(guò)150kDa分子量的重組蛋白；同時(shí)我們收集與建立了多種高效表達(dá)菌株（包括低溫誘導(dǎo)表達(dá)菌株，10-16℃超低溫誘導(dǎo)表達(dá)蛋白），以保證每一個(gè)重組蛋白制備的品質(zhì)，為客戶(hù)提供優(yōu)質(zhì)的服務(wù)。 大腸桿菌（E.coli）重組蛋白表達(dá)技術(shù)經(jīng)過(guò)多年的發(fā)展，已經(jīng)變得非常成熟。但想要在大腸桿菌表達(dá)體系獲得較高水平的可溶性以及高產(chǎn)量的蛋白表達(dá)，尤其是針對(duì)大分子蛋白和某些藥物類(lèi)蛋白，一個(gè)優(yōu)秀的表達(dá)策略必不可少�？蛻�(hù)只需要提供我們一段蛋白序列，CDS或蛋白名稱(chēng)，我們富有經(jīng)驗(yàn)的科學(xué)家均可以為您在較短的時(shí)間內(nèi)制定一個(gè)完整的蛋白表達(dá)和純化方案。常見(jiàn)的小分子（分子量<10 kDa）蛋白類(lèi)藥物，如Leptin，利拉魯肽，EGF等在原核表達(dá)過(guò)程中以親和標(biāo)簽+融合蛋白形式進(jìn)行表達(dá)，發(fā)酵和純化。此類(lèi)蛋白的難點(diǎn)在于蛋白均以包涵體的形式進(jìn)行表達(dá)，后期需要進(jìn)行工藝繁瑣的蛋白變復(fù)性處理。 重組蛋白的高效表達(dá)，通常以下幾個(gè)方面會(huì)涉及： 宿主體系選擇 蛋白需求不同，那么表達(dá)宿主體系也不盡相同。原核表達(dá)體系常用的宿主為大腸桿菌和枯草桿菌，前者表達(dá)量高，后期產(chǎn)品需要去除內(nèi)毒素；后者蛋白產(chǎn)量相對(duì)較低，但不產(chǎn)生內(nèi)毒素。重組蛋白大腸桿菌表達(dá)常采用BL21（DE3）和K-12衍生菌株作為表達(dá)宿主。 表達(dá)質(zhì)粒體系選擇 目前最為常用的重組蛋白表達(dá)質(zhì)粒載體融合了復(fù)制子(Replicon)、啟動(dòng)子(promoter)、篩選標(biāo)簽(selection marker)、多克隆位點(diǎn)（MCS）和融合蛋白移除策略(fusion tag removal strategy) 卡梅德生物的科學(xué)家通過(guò)改造pET載體，獲得雙表達(dá)質(zhì)粒（BiPlasmid vector），該質(zhì)粒含有雙MCS位點(diǎn)，雙T7啟動(dòng)子，雙lac操縱子和雙核糖體結(jié)合位點(diǎn)，利用該質(zhì)粒我們可以為客戶(hù)進(jìn)行一次轉(zhuǎn)染操作，而獲得兩種蛋白的獨(dú)立表達(dá)。同時(shí)我們構(gòu)建了含有低溫誘導(dǎo)蛋白表達(dá)元件的pCold系列載體，該載體能夠在16℃條件下經(jīng)過(guò)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)大分子量蛋白，如上清表達(dá)150kDa活性蛋白。 融合標(biāo)簽選擇 親和標(biāo)簽：蛋白重組表達(dá)過(guò)程中采用親和標(biāo)簽融合表達(dá)有兩方面的作用：一方面是為了使蛋白純化過(guò)程變得更加容易；另一方面是為了促進(jìn)某些不溶性蛋白可溶。蛋白標(biāo)簽可分兩類(lèi)：一類(lèi)是短肽類(lèi)標(biāo)簽；一類(lèi)是長(zhǎng)肽以融合蛋白（fused partner）形式共表達(dá)。使用不同的蛋白標(biāo)簽需要根據(jù)具體案例來(lái)分析。 蛋白重組表達(dá)策略組合 重組蛋白的表達(dá)往往不像理論那樣一帆風(fēng)順，在實(shí)際的表達(dá)過(guò)程中有可能產(chǎn)生各種各樣的問(wèn)題。在選擇一個(gè)最優(yōu)的蛋白表達(dá)策略非常困難的情況下，那么采用看似笨拙的方法，有可能會(huì)成為一種意想不到的“成功捷徑”，比如項(xiàng)目要求構(gòu)建表達(dá)兩種重組蛋白時(shí)，構(gòu)建6種不同的表達(dá)質(zhì)粒，意味著有36種不同的表達(dá)條件組合，通過(guò)高通量微量蛋白表達(dá)實(shí)驗(yàn)一次性就可獲得最佳蛋白表達(dá)條件組合，后續(xù)中式飛行試驗(yàn)和成本控制會(huì)變得相對(duì)容易。 我們的服務(wù)優(yōu)勢(shì) --密碼子優(yōu)化：包含稀有密碼子分析，蛋白親水性分析和跨膜結(jié)構(gòu)域的預(yù)測(cè)分析 --多種融合標(biāo)簽載體和宿主，以保證高可溶蛋白表達(dá)和高蛋白活性 --多種規(guī)模蛋白發(fā)酵模式：小規(guī)模（1L，10L和30L）、大規(guī)模（80L，130L，250L和500L發(fā)酵罐） --短時(shí)間內(nèi)制備高純度毫克級(jí)，克級(jí)重組蛋白 --低內(nèi)毒素：LAL檢測(cè)法<0.1EU/ug --完整的GMP文件支撐體系，保證您的產(chǎn)品所有材料、試劑和制備信息可追溯  卡梅德生物科技（天津）有限公司真誠(chéng)期待與您的合作！ |
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2樓2019-08-26 15:32:05
蘇菲羅斯
銀蟲(chóng) (初入文壇)
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3樓2019-08-27 10:43:37
4樓2019-08-29 08:07:08
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