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small28

新蟲 (著名寫手)
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各位，我的多肽樣品在做maldi tof時，為啥一級譜出現的主要峰數據都差不多呢，盡管它們是在hplc上相隔很遠的保留時間接下來的。。。
于是，想去做個lc ms。那么lc ms也是要先做一級嗎，，能不能直接做二級，這樣的話，假如樣品復雜的話峰數據會不會很亂，因為聽說lc ms上一個hplc峰對應一張圖？如果先做一級，那母離子怎么選呢，會不會多種物質的母離子峰在一張圖里面呢。。。

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proteomicszj

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蛋白的LC-MS/MS鑒定已經非常程序化了。一次LC-MS/MS， 一小時液相梯度內可以鑒定樣品中多達4000多種蛋白質。大部分情況下一張MS/MS質譜圖來主要自一個母離子。
57樓2019-08-24 09:56:47
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small28

新蟲 (著名寫手)
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57樓: Originally posted by proteomicszj at 2019-08-24 09:56:47
蛋白的LC-MS/MS鑒定已經非常程序化了。一次LC-MS/MS， 一小時液相梯度內可以鑒定樣品中多達4000多種蛋白質。大部分情況下一張MS/MS質譜圖來主要自一個母離子。

如果不做一級直接做二級，儀器會自動選母離子打碎繼續(xù)做二級么

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58樓2019-08-24 10:42:30
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proteomicszj

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58樓: Originally posted by small28 at 2019-08-24 10:42:30
如果不做一級直接做二級，儀器會自動選母離子打碎繼續(xù)做二級么
...

沒有一級質譜，怎么篩選母離子？成本是一樣的，不要考慮價格。
64樓2019-08-24 12:29:58
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small28

新蟲 (著名寫手)
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64樓: Originally posted by proteomicszj at 2019-08-24 12:29:58
沒有一級質譜，怎么篩選母離子？成本是一樣的，不要考慮價格。...

那就是還是要先做一級質譜么，如果一個hplc峰里包含了兩三種物質，那一級譜上會不會有多個母離子呀，那又怎么選呢

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65樓2019-08-24 12:53:36
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proteomicszj

新蟲 (小有名氣)
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65樓: Originally posted by small28 at 2019-08-24 12:53:36
那就是還是要先做一級質譜么，如果一個hplc峰里包含了兩三種物質，那一級譜上會不會有多個母離子呀，那又怎么選呢
...

根據母離子信號強度，隨機、不重復分析，一次上機可以依次分析一個HPLC峰上幾百個母離子。
67樓2019-08-24 14:47:52
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small28

新蟲 (著名寫手)
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67樓: Originally posted by proteomicszj at 2019-08-24 14:47:52
根據母離子信號強度，隨機、不重復分析，一次上機可以依次分析一個HPLC峰上幾百個母離子。...

那這個母離子的判斷是人工選的，還是儀器軟件自帶識別的呢

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68樓2019-08-24 15:02:43
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68樓: Originally posted by small28 at 2019-08-24 15:02:43
那這個母離子的判斷是人工選的，還是儀器軟件自帶識別的呢
...

機器根據信號強度隨機選擇母離子
76樓2019-08-24 23:25:28
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76樓: Originally posted by proteomicszj at 2019-08-24 23:25:28
機器根據信號強度隨機選擇母離子...

好的，謝謝，還想請教一下，在hplc峰上不同保留時間的峰打出得一級譜，為啥信號都很相似呢，就是信號強的數據一樣，，這是說明，不同holc的峰，物質特性類似嗎？

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81樓2019-08-25 14:16:33
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81樓: Originally posted by small28 at 2019-08-25 14:16:33
好的，謝謝，還想請教一下，在hplc峰上不同保留時間的峰打出得一級譜，為啥信號都很相似呢，就是信號強的數據一樣，，這是說明，不同holc的峰，物質特性類似嗎？
...

一般不一樣，除非相鄰比較近，或者很強的雜質污染。
88樓2019-08-25 21:37:17
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88樓: Originally posted by proteomicszj at 2019-08-25 21:37:17
一般不一樣，除非相鄰比較近，或者很強的雜質污染。...

好的，謝謝，您是指樣品存在雜質污染還是儀器呢，樣品分別是在自己的hplc上接的峰，然后純度檢測跑出單峰后，再凍干送樣的

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89樓2019-08-25 21:46:31
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89樓: Originally posted by small28 at 2019-08-25 21:46:31
好的，謝謝，您是指樣品存在雜質污染還是儀器呢，樣品分別是在自己的hplc上接的峰，然后純度檢測跑出單峰后，再凍干送樣的
...

一般是樣品問題。LC-MS/MS分析一下，MALDI-TOF測多肽的靈敏度差多了。
92樓2019-08-26 20:49:59
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92樓: Originally posted by proteomicszj at 2019-08-26 20:49:59
一般是樣品問題。LC-MS/MS分析一下，MALDI-TOF測多肽的靈敏度差多了。...

好的，謝謝你！

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93樓2019-08-26 20:54:26
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