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含羞草liu新蟲 (小有名氣)
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[交流]
基因組抽提如何避免鹽析出
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大家好！我最近在抽提動(dòng)物基因組時(shí)，遇到了一些問題，麻煩高手幫忙解疑。 我采用傳統(tǒng)方法抽提基因組的。具體步驟為： 1. 液氮磨碎樣品，加1ml基因組抽提Buffer（組分為：10mM Tris-HCl，100mM EDTA，1% SDS）和10ul蛋白酶K 50度水浴消化過夜； 2. 后加2ul RNase A 37度消化1h； 3. 加等體積的酚：氯仿：異戊醇，混勻10min，離心取上清，共純化兩遍； 4. 取上清，加等體積的氯仿（-20度保存），混勻10min，離心后取上清； 5. 加等體積的異丙醇和1/10體積的醋酸鈉，混勻。 問題就在這第5步，加過異丙醇和醋酸鈉后，馬上就開始出現(xiàn)白色絮狀沉淀，然后再混時(shí)，很快就出現(xiàn)很多顆粒狀的白色東西，離心后發(fā)現(xiàn)，管底有非常多白色的沉淀，是鹽。之后用75%乙醇也洗不掉。同樣的方法做過很多次，之前從來沒遇到這種情況，不知怎么鹽會(huì)析出。請高手指點(diǎn)，感激不盡�。�！ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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