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小白hmmm新蟲 (初入文壇)
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[求助]
pcr擴增產(chǎn)物直接膠回收可以嗎？ 已有1人參與
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①本人菜鳥，想問一下pcr擴增后，5ul跑膠出現(xiàn)單一條帶，剩下的不進行切膠回收，直接送去測序可以嗎？ ②連續(xù)三次，都是跑膠沒問題，膠回收測序出不來。想知道是不是膠回收沒做好？ @飛約瘋?cè)嗽?/u> @wizardfan 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2019-07-30 22:04:39
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3樓2019-07-30 09:24:34
木元雨
木蟲 (職業(yè)作家)
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★
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2019-07-30 22:04:29
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2019-07-30 22:04:29
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有直接測pcr產(chǎn)物的，不過你要和測序公司溝通引物的問題。膠回收后，可以做個t克隆，轉(zhuǎn)到大腸桿菌里面測菌液 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2019-07-30 09:13:05
GRUBBY_WU
鐵桿木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 153 (高中生)
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- 專業(yè): 人類遺傳學
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2019-07-30 22:04:51
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西門吹雪170: 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2019-07-30 22:04:51
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pcr單一條帶可以消化dntp和primer后直接測序（一般公司做消化），如果條帶不帶一膠回收后測序，條帶單一可能含多種產(chǎn)物，大小相同，做ta克隆在送菌液測序。正常情況下條帶單一，切膠純化后測不出來沒信號可能是提供引物有問題，亂峰可能是有ploy結(jié)構(gòu)，換另一個引物測。送公司pcr產(chǎn)物測序，對方也會取部分跑膠檢查條帶是否單一，單一直接消化，不帶一也是切角純化后測的 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2019-07-30 10:28:43
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