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分子克隆實驗指南4-分章節(jié)版 已將每一章節(jié)單獨分出來
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目錄 上冊 第1章 DNA的分離及定量 1 導言 2 方案1 SDS堿裂解法制備質(zhì)粒DNA：少量制備 9 方案2 SDS堿裂解法制備質(zhì)粒DNA：大量制備 12 方案3 從革蘭氏陰性菌（如Ecolz中分離DNA 15 方案4 乙醇法沉淀DNA 17 方案5 異丙醇法沉淀DNA 21 方案6 用微量濃縮機進行核酸的濃縮和脫鹽 22 方案7 丁醇抽提法濃縮核酸 23 方案8 聚乙二醇沉淀法制備Ml3噬菌體單鏈DNA 24 方案9 Ml3噬菌體鋪平板 27 方案10 Ml3噬菌體液體培養(yǎng) 30 方案11 Ml3噬菌體雙鏈（復制型）DNA的制備 32 方案12 利用有機溶劑分離純化高分子質(zhì)量DNA 35 方案13 用蛋白酶K和苯酚從哺乳動物細胞中分離高分子質(zhì)量DNA 37 方案14 一步法同時提取細胞或組織中的DNA、RNA和蛋白質(zhì) 43 方案15 從鼠尾或其他小樣本中制備基因組DNA 46 替代方案：不使用有機溶劑從鼠尾分離DNA 48 替代方案：一管法從鼠尾中分離DNA 49 方案16 快速分離酵母DNA 50 方案17 微型凝膠電泳后使用溴化乙錠(EB)估算條帶中DNA數(shù)量 52 方案18 利用Hoechst33258通過熒光分析儀估算DNA濃度 53 方案19 用PicoGreen定量溶液中的DNA 55 信息欄 56 第2章 DNA分析 62 導言 63 方案1 瓊脂糖凝膠電泳 73 方案2 瓊脂糖凝膠中DNA的染色檢測 76 方案3 聚丙烯酰胺凝膠電泳 80 方案4 聚丙烯酰胺凝膠中DNA的染色檢測 85 方案5 聚丙烯酰胺凝膠中DNA的放射自顯影檢測 86 方案6 堿性瓊脂糖凝膠電泳 87 附加方案：堿性瓊脂糖凝膠的放射自顯影 90 方案7 成像：放射自顯影和感光成像 91 方案8 用玻璃珠從瓊脂糖凝膠中回收DNA 96 方案9 低熔點瓊脂糖凝膠中DNA的回收：有機溶劑抽提法 98 方案10 聚丙烯酰胺凝膠中DNA片段的回收：壓碎與浸泡法 101 方案11 Southern印跡 103 方案12 Southern印跡：DNA從一塊瓊脂糖凝膠同時向兩張膜轉(zhuǎn)移 110 方案13 采用放射性標記探針對固定在膜上的核酸DNA進行Southern雜交 112 附加方案：從膜上洗脫探針 117 信息欄 119 第3章 質(zhì)粒載體克隆與轉(zhuǎn)化 122 導言 123 方案1 制備和轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌的Hanahan方法：高效轉(zhuǎn)化策略 126 方案2 制備和轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌的Inoue方法：“超級感受態(tài)”細胞 131 方案3 大腸桿菌的簡單轉(zhuǎn)化：納米顆粒介導的轉(zhuǎn)化 135 替代方案：一步法制備感受態(tài)大腸桿菌：在同一溶液中轉(zhuǎn)化和儲存細菌細胞 136 方案4 電穿7L法轉(zhuǎn)化大腸桿菌 138 方案5 質(zhì)粒載體克�。憾ㄏ蚩寺� 143 方案6 質(zhì)粒載體克�。浩侥┒丝寺� 145 方案7 質(zhì)粒DNA的去磷酸化 148 方案8 向平末端DNA添加磷酸化銜接子／接頭 150 方案9 克隆PCR產(chǎn)物：向擴增DNA的末端添加限制性酶切位點 151 方案10 克隆PCR產(chǎn)物：平末端克隆 154 方案11 克隆PCR產(chǎn)物：制各T載體 157 方案12 克隆PCR產(chǎn)物：TA克隆 159 方案13 克隆PCR產(chǎn)物：TOPO TA克隆 161 方案14 使用X-Gal和IPTG篩選細菌菌落：a-互補 165 信息欄 167 第4章 Gateway重組克隆 205 導言 206 方案1 擴增Gatewav載體 210 方案2 制備可讀框入門克隆和目的克隆 213 方案3 應用多位點LR克隆反應制備目的克隆 219 信息欄 222 第5章 細菌人工染色體及其他高容量載體的應用 223 導言 224 方案1 BAC DNA的小量分離和PCR檢驗 235 方案2 BAC DNA的大量制備和線性化 238 方案3 通過脈沖電場凝膠電泳檢驗BAC DNA的質(zhì)量和數(shù)量 241 方案4 兩步BAC工程：穿梭載體DNA的制備 242 方案5 A同源臂(A-Box)和B同源臂(B-Box)的制備 244 方案6 克隆A和B同源臂到穿梭載體 247 方案7 重組穿梭載體的制備和檢驗 249 方案8 通過電穿7L法轉(zhuǎn)化重組穿梭載體到感受態(tài)BAC宿主細胞 251 方案9 共合體的檢驗和重組BAC克隆的篩選 253 方案10 一步BAC修飾：質(zhì)粒制備 256 方案11 A同源臂(A-Box)的制備 259 方案12 克隆A同源臂到報道穿梭載體 260 方案13 用RecA載體轉(zhuǎn)化BAC宿主 263 方案14 轉(zhuǎn)移報道載體到BACiRecA細胞以及共合體的篩選 265 方案15 釀酒酵母(S.cerevisiae)的生長和DNA制備 267 方案16 酵母DNA的小量制備 269 信息欄 270 第6章 真核細胞RNA的提取、純化和分析 275 導言 276 方案1 從哺乳動物的細胞和組織中提取總RNA 279 替代方案 從小量樣本提取RNA 281 方案2 從斑馬魚胚胎和成體中提取總RNA 282 方案3 從黑腹果蠅提取總RNA 283 方案4 從秀麗隱桿線蟲中提取總RNA 285 方案5 從釀酒酵母菌中采用熱酸酚提取總RNA 287 方案6 RNA定量和儲存 289 方案7 RNA的乙醇沉淀 295 方案8 通過無RNase的DNaseI處理去除RNA樣品中的DNA污染 297 方案9 oligo(dT)磁珠法提取poly(A) mRNA 298 方案10 按照大小分離RNA：含甲醛的瓊脂糖凝膠電泳 308 方案11 根據(jù)分子質(zhì)量大小分離RNA: RNA的尿素變性聚丙烯酰胺凝膠電泳 312 方案12 瓊脂糖凝膠中變性RNA的轄膜和固定 319 替代方案 下行毛細管轉(zhuǎn)移 323 方案13 聚丙烯酰胺凝膠的電轉(zhuǎn)移和膜固定 325 方案14 Northern雜交 327 方案15 純化RNA的點雜交和狹縫雜交 330 方案16 用核酸酶Sl對RNA作圖 342 方案17 核糖核酸酶保護分析：用核糖核酸酶和放射性標記的RNA探針對RNA作圖 349 方案18 引物延伸法分析RNA 355 信息欄 359 第7章 聚合酶鏈反應 363 導言 364 方案1 基礎(chǔ)PCR 375 方案2 熱啟動PCR 380 方案3 降落PCR 383 方案4 高GC含量模板的PCR擴增 385 方案5 長片段高保真PCR (IA PCR) 390 方案6 反向PCR 393 方案7 巢式PCR 397 方案8 mRNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物cDNA的擴增：兩步法RT-PCR 400 方案9 由mRNA的5'端進行序列的快速擴增：5'-RACE 409 方案10 由mRNA的3'端進行序列的快速擴增：3 '-RACE 416 方案11 使用PCR篩選克隆 422 信息欄 424 第8章 生物信息學 431 導言 432 方案1 使用ucsc基因組瀏覽器將基因組注釋可視化 434 方案2 使用BLAST和ClustalW進行序列比對和同源性檢索 444 方案3 使用Primer3Plus設(shè)計PCR引物 450 方案4 使用微陣列和RNA-seq進行表達序列譜分析 461 方案5 將上億短讀段定位至參考基因組上 472 方案6 識別ChIP-seq數(shù)據(jù)集中富集的區(qū)域（尋峰） 483 方案7 發(fā)現(xiàn)順式調(diào)控基序 495 信息欄 503 中冊 第9章 實時熒光聚合酶鏈反應定量檢測DNA及RNA 509 導言 510 方案1 實時PCR反應用引物和探針濃度的優(yōu)化 532 方案2 制作標準曲線 537 方案3 實時熒光PCR定量檢測DNA 540 方案4 實時熒光PCR定量檢測RNA 542 方案5 實時熒光PCR實驗數(shù)據(jù)的分析和歸一化 545 信息欄 550 第10章 核酸平臺技術(shù) 551 導言 552 方案1 即制微陣列 560 方案2 Round AiRoundB DNA擴增 564 方案3 核小體DNA和其他小于500bp的DNA的T7線性擴增(TIAD) 567 方案4 RNA的擴增 572 方案5 RNA的Cvanine-dUTP直接標記 578 方案6 RNA的氨基烯丙基-dUTP間接標記 581 方案7 用Klenow酶對DNA進行Cyanine-dCTP標記 583 方案8 DNA的間接標記 585 方案9 封閉自制微陣列上的多聚賴氨酸 587 方案10 自制微陣列的雜交 589 第11章 DNA測序 595 導言 596 方案1 毛細管測序質(zhì)粒亞克隆的制備 620 方案2 毛細管測序之PCR產(chǎn)物的制備 625 方案3 循環(huán)測序反應 627 方案4 全基因組：手工文庫制備 630 方案5 全基因組：自動化的無索引文庫制備 636 附加方案 自動化的文庫制備 642 方案6 全基因組：自動化的帶索引文庫制備 644 方案7 用于Illumina測序的3kb末端配對文庫的制備 651 方案8 用于Illumina測序的8kb末端配對文庫的制備 659 附加方案 AMPure磁珠校準 671 方案9 RNA—Seq:RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA及其擴增 673 附加方案 RNACleanⅪ’磁珠純化/RNA—Seq前） 679 方案10 液相外顯子組捕獲 680 附加方案 AMPure XP磁珠純化 688 附加方案 瓊脂糖凝膠大小篩選 689 方案11 自動化大小篩選 690 方案12 用SYBR Green-qPCR進行文庫定量 693 方案13 用PicoGreen熒光法進行文庫DNA定量 696 方案14 文庫定量：用Qubit系統(tǒng)對雙鏈或單鏈DNA進行熒光定量 700 方案15 為454測序制備小片段文庫 702 方案16 單鏈DNA文庫的捕獲及emPCR 708 方案17 Rochei454測序：執(zhí)行一個測序運行 714 方案18 結(jié)果有效性確認 721 方案19 測序數(shù)據(jù)的履量評估 723 方案20 數(shù)據(jù)分析 724 信息欄 725 第12章 哺乳動物細胞中DNA甲基化分析 729 導言 730 方案1 DNA亞硫酸氫鹽測序法檢測單個核苷酸的甲基化 735 方案2 甲基化特異性聚合酶鏈反應法檢測特定基因的DNA甲基化 742 方案3 基于甲基化胞嘧啶免疫沉淀技術(shù)的DNA甲基化分析 745 方案4 高通量深度測序法繪制哺乳動物細胞DNA甲基化圖譜 749 方案5 亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化的DNA文庫的Roche454克隆測序 760 方案6 亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化的DNA文庫的Illumina測序 765 信息欄 770 第13章 標記的DNA探針、RNA探針和寡核苷酸探針的制備 775 導言 776 方案1 隨機引物法：用隨機寡核苷酸延伸法標記純化的DNA片段 792 方案2 隨機引物法：在融化瓊脂糖存在下用隨機寡核苷酸延伸法標記DNA 798 方案3 用切口平移法標記DNA探針 800 方案4 用聚合酶鏈反應標記DNA探針 804 附加方案 不對稱探針 808 方案5 體外轉(zhuǎn)錄合成單鏈RNA探針 809 附加方案 用PCR法將噬菌體編碼的RNA聚合酶啟動子加至DNA片段上 816 方案6 用隨機寡核苷酸引物法從mRNA合成cDNA探針 818 方案7 用隨機寡核苷酸延伸法制備放射性標記的消減cDNA探針 820 方案8 用大腸桿菌DNA聚合酶I的Klenow片段標記雙鏈DNA的3' 端 825 方案9 用堿性磷酸酶進行DNA片段的去磷酸化 831 方案10 含5'突出羥基端的DNA分子磷酸化 833 方案11 去磷酸化的平端或5'凹端DNA分子的磷酸化 836 方案12 用T4多核苷酸激酶進行寡核苷酸5'端的磷酸化 839 方案13 用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶標記寡核苷酸3'端 841 替代方案 用TdT合成非放射性標記的探針 843 附加方案 加尾反應 843 附加方案 合成非放射性標記探針的修飾 844 方案14 用大腸桿菌DNA聚合酶I的Klenow片段標記合成的寡核苷酸 845 方案15 用乙醇沉淀法純化標記的寡核苷酸 849 方案16 用空間排阻層析法純化標記的寡核苷酸 850 方案17 用Sep-PakCl8柱色譜法純化標記的寡核苷酸 852 方案18 寡核苷酸探針在水溶液中雜交： 在含季銨鹽緩沖液中洗滌 854 信息欄 857 第14章 體外誘變方法 871 尋言 872 方案1 用易錯DNA聚合酶進行隨機誘變 879 方案2 重疊延伸PCR產(chǎn)生插入或缺失誘變 890 方案3 以雙鏈DNA為模板的體外誘變：用DpnI選擇突變體 897 方案4 突變型B一內(nèi)酰胺酶選擇法定點誘變 904 方案5 通過單一限制性位點消除進行寡核苷酸指導的誘變/USE誘變） 910 方案6 利用密碼子盒插入進行飽和誘變 915 方案7 隨機掃描誘變 922 方案8 多位點定向誘變 926 方案9 基于PCR的大引物誘變 930 信息欄 933 第15章 向培養(yǎng)的哺乳動物細胞中導入基因 937 導言 938 方案1 陽離子脂質(zhì)試劑介導的DNA轉(zhuǎn)染 942 替代方案 采用DOTMA和DOGS進行轉(zhuǎn)染 948 附加方案 單層細胞組織化學染色檢測B一半乳糖苷酶 950 方案2 磷酸鈣介導的質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染真核細胞 952 替代方案 磷酸鈣介導的質(zhì)粒DNA高效轉(zhuǎn)染真核細胞 956 方案3 磷酸鈣介導的高分子質(zhì)量基因組DNA轉(zhuǎn)染細胞 959 替代方案 磷酸鈣介導的貼壁細胞的轉(zhuǎn)染 962 替代方案 磷酸鈣介導的懸浮生長細胞的轉(zhuǎn)染 963 方案4 DEAE-葡聚糖介導的轉(zhuǎn)染：高效率的轉(zhuǎn)染方法 964 替代方案 DEAE-葡聚糖介導的轉(zhuǎn)染：提高細胞活力的方案 966 方案5 電穿孑L轉(zhuǎn)染DNA 968 方案6 通過alamarBlue法分析細胞活力 972 方案7 通過乳酸脫氫酶法分析細胞活力 974 方案8 通過MTT法分析細胞活力 977 信息欄 980 第16章 向哺乳動物細胞中導入基因：病毒載體 998 導言 999 方案1 直接克隆法構(gòu)建重組腺病毒基因組 1 019 方案2 將克隆的重組腺病毒基因組釋放用于挽救和擴增 1023 方案3 氯化銫梯度沉降法純化重組腺病毒 1028 方案4 限制性內(nèi)切核酸酶消化法鑒定純化后的重組腺病毒基因組 1031 方案5 TCID50終點稀釋結(jié)合qPCR測定重組腺病毒感染滴度 1034 附加方案 準備qPCR的DNA標準品 1042 方案6 濃縮傳代和Real-Time qPCR法檢測有復制能力腺病毒(RCA) 1043 方案7 瞬時轉(zhuǎn)染法制備rAAV 1051 方案8 氯化銫梯度沉降法純化rAAV 1054 方案9 碘克沙醇梯度離心法純化rAAV 1059 方案10 肝素親和層析法純化rAAV2 1062 方案11 陰離子交換柱層析法從碘克沙醇梯度離心后的rAAV樣本中富集完全包裝病毒 1065 方案12 實時定量PCR法測定rAAV基因組拷貝數(shù) 1068 方案13 TCID50終點稀釋結(jié)合qPCR法靈敏測定rAAV惑染滴度 1071 方案14 負染色法和高分辨電子顯微鏡分析rAAV樣本形態(tài) 1074 方案15 銀染SDS-PAGE分析rAAV純度 1076 方案16 高滴度反轉(zhuǎn)錄病毒和慢病毒載體的制備 1079 方案17 慢病毒載體的滴定 1085 方案18 監(jiān)測慢病毒載體儲備液中的可復制型病毒 1089 信息欄 1091 下冊 第17章 利用報道基因系統(tǒng)分析基因表達調(diào)控 1102 導言 1103 方案1 哺乳動物細胞提取物中B一半乳糖苷酶的測定 1112 附加方案 化學發(fā)光實驗檢測B一半乳糖苷酶活性 1115 方案2 單螢光素酶報道基因?qū)嶒?1118 方案3 雙螢光素酶報道基因?qū)嶒?1123 方案4 酶聯(lián)免疫吸附試驗定量檢測綠色熒光蛋白 1128 方案5 用四環(huán)素調(diào)控基因表達建立細胞系 1131 附加方案 有限稀釋法篩選懸浮細胞的穩(wěn)定克隆 1138 信息欄 1140 第18章 RNA干擾與小RNA分析 1170 導言 1171 方案1 雙鏈siRNA制備 1185 方案2 通過轉(zhuǎn)染雙鏈siRNA在哺乳動物細胞中進行RNA干擾 1187 方案3 通過轉(zhuǎn)染雙鏈siRNA在果蠅S2細胞中進行RNA干擾 1190 方案4 體外轉(zhuǎn)錄法制備dsRNA 1192 方案5 采用dsRNA浸泡果蠅S2細胞進行RNA干擾 1196 方案6 采用dsRNA轉(zhuǎn)染在果蠅S2細胞中進行RNA干擾 1198 方案7 小RNA的Northern雜交分析 1199 方案8 反轉(zhuǎn)錄定量PCR分析小RNA 1203 方案9 構(gòu)建小RNA高通量測序文庫 1206 方案10 抑制miRNA功能的反義寡核苷酸制備 1215 方案11 在哺乳動物細胞中通過反義寡核苷酸抑制miRNA功能 1216 方案12 在果蠅S2細胞中通過反義寡核苷酸抑制miRNA功能 1218 信息欄 1219 第19章 克隆基因的表達以及目的蛋白的純化和分析 1225 導言 1226 方案1 在大腸桿菌中利用可用IPTG誘導的啟動子表達克隆化基因 1249 附加方案 目標蛋白可溶性表達的小量試驗 1255 替代方案 在大腸桿菌中利用阿拉伯糖BAD啟動子表達克隆基因 1260 替代方案 信號肽融合雖白的亞細胞定位 1261 方案2 用桿狀病毒表達系統(tǒng)表達克隆基因 1265 附加方案 噬菌斑測定法確定桿狀病毒原液的滴度 1271 替代方案 用于轉(zhuǎn)染昆蟲細胞的桿粒DNA制備 1274 方案3用 甲醇誘導啟動子AOX1在畢赤酵母中表達克隆基因 1277 附加方案 酵母培養(yǎng)物的凍存 1287 方案4 用于純化大腸桿菌中表達可溶性蛋白的細胞提取物的制備 1291 附加方案 酵母細胞玻璃珠裂解法 1296 替代方案 溫和的熱誘導的酶裂解法制備大腸桿菌細胞提取物 1298 替代方案 用溶菌酶裂解和凍融法聯(lián)用制備大腸桿菌細胞提取物 1300 方案5 采用固化的金屬親和層析純化多聚組氨酸標記的蛋白質(zhì) 1302 附加方案 Niz -NTA樹脂的清洗與再生 1309 替代方案 組氨酸標簽蛋白的快速液相色譜純化 1310 方案6 采用谷胱甘肽樹脂以親和層析純化融合蛋白 1314 方案7 包含體中表達蛋白的增溶 1321 方案8 蛋白質(zhì)的SDS-PAGE 1325 替代方案 用考馬斯亮藍進行SDS-PAGE凝膠染色的各種不同方法 1335 替代方案 用銀鹽進行SDS-PAGE凝膠染色 1336 方案9 蛋白質(zhì)的免疫印跡分析 1340 方案 10測定蛋白質(zhì)濃度的方法 1347 信息欄 1353 第20章 利用交聯(lián)技術(shù)分析染色質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能 1358 導言 1359 方案1 甲醛交聯(lián) 1369 方案2 制備用于染色質(zhì)免疫沉淀的交聯(lián)染色質(zhì) 1371 方案3 染色質(zhì)免疫沉淀(ChIP) 1373 方案4 染色質(zhì)免疫沉淀-定量聚合酶鏈反應( ChIP-qPCR) 1377 方案5 染色質(zhì)免疫沉淀-芯片雜交（ChIP-chip） 1378 方案6 染色質(zhì)免疫沉淀-高通量測序(ChIP-seq) 1385 方案7 交聯(lián)細胞3C文庫的制備 1389 方案8 環(huán)形染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP-loop）文庫的制備 1393 方案9 連接產(chǎn)物對照組文庫的制備 1398 方案10 PCR檢測3C、ChIP-loop和對照文庫中的3C連接產(chǎn)物：文庫滴定與相互作用頻率分析 1400 方案11 3C、ChIP-loop和對照組文庫的4C分析 1404 方案12 3C、ChIP-loop和對照組文庫的5C分析 1408 信息欄 1412 第21章 紫外交聯(lián)免疫沉淀(CLIP)技術(shù)進行體內(nèi)RNA結(jié)合位點作圖 1415 導言 1416 方案1 CLIP實驗免疫沉淀嚴謹性的優(yōu)化 1424 方案2 活細胞的紫外交聯(lián)和裂解物制備 1429 方案3 RNA酶滴定、免疫沉淀及SDS-PAGE 1432 方案4 3'-接頭的連接祁用SDS-PAGE進行大小選擇 1441 替代方案 去磷酸化RL3接頭5端的標記 1445 方案5 RNA標簽的分離、5二接頭的連接和反轉(zhuǎn)錄PCR擴增 1446 方案6 RNA CLIP標簽測序 1456 方案7 RNA接頭膠回收及保存 1458 信息欄 1460 第22章 Gateway相容酵母單雜交和雙雜交系統(tǒng) 1464 導言 1465 方案1 構(gòu)建酵母單雜交DNA-誘餌菌株 1474 替代方案 用復性引物從DNA誘餌中獲得入門克隆產(chǎn)物 1481 方案2 生成酵母雙雜交DB-誘餌菌株 1484 方案3 從活化域捕獲文庫中鑒定相互作用分子 1490 方案4 高效的酵母轉(zhuǎn)化 1496 方案5 用于B-半乳糖苷酶活力的菌落轉(zhuǎn)移比色測定 1500 方案6 酵母克隆的PCR 1502 信息欄 1504 附錄1 試劑和緩沖液 1507 附錄2 常用技術(shù) 1533 附錄3 檢測系統(tǒng) 1541 附錄4 一般安全原則和危險材料 1565 索引 1573 |
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- 附件 2 : 01_分子克隆實驗指南_第四版_第一章.pdf
- 附件 3 : 02_分子克隆實驗指南_第四版_第二章.pdf
- 附件 4 : 03_分子克隆實驗指南_第四版_第三章.pdf
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- 附件 6 : 04_分子克隆實驗指南_第四版_第四章_新.pdf
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[考研]
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[考研] 268求調(diào)劑 +6 | 好運連綿不絕 2026-03-02 | 6/300 |
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