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三只0小豬仔

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[求助] 菌落pcr測(cè)序不順利已有1人參與

我做的菌落PCR，以載體通用引物為正向引物，插入的目的基因片段的引物為反向引物，抗性為Amp，凝膠電泳檢測(cè)菌落pcr產(chǎn)物大小與目的片段相近，之后挑取鑒定為陽(yáng)性的單菌落在700?l 含Amp的LB培養(yǎng)基中搖菌，渾濁后取500?l送至公司測(cè)序，但是公司一直顯示菌液未生長(zhǎng)，三次了都是這種情況，不知道是不是我實(shí)驗(yàn)出了什么問(wèn)題，請(qǐng)各位大神指導(dǎo)，不勝感激，謝謝。

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1樓 2019-06-25 11:51:47

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木元雨

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★
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要問(wèn)下你的菌是什么菌種，培養(yǎng)條件和公司的需求是不是一致，還有就是公司的抗性會(huì)不會(huì)加錯(cuò)了？

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2樓2019-06-25 12:44:05

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xinxiyuzhou

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【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

這樣的話你送幾個(gè)陽(yáng)性克隆的質(zhì)粒吧。我們先前給生工送菌液，總是說(shuō)無(wú)信號(hào)，送抽提的質(zhì)粒就解決了。增加了時(shí)間和人力成本，但是結(jié)果靠譜。

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3樓2019-06-26 09:41:54

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引用回帖:

3樓: Originally posted by xinxiyuzhou at 2019-06-26 09:41:54
這樣的話你送幾個(gè)陽(yáng)性克隆的質(zhì)粒吧。我們先前給生工送菌液，總是說(shuō)無(wú)信號(hào)，送抽提的質(zhì)粒就解決了。增加了時(shí)間和人力成本，但是結(jié)果靠譜。

但是抽提質(zhì)粒后跑膠目的條帶大小不一致所以不明白為什么

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4樓2019-06-30 19:38:28

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【答案】應(yīng)助回帖

引用回帖:

4樓: Originally posted by 三只0小豬仔 at 2019-06-30 19:38:28
但是抽提質(zhì)粒后跑膠目的條帶大小不一致所以不明白為什么
...

那不應(yīng)該的，你做一下質(zhì)粒PCR或者酶切再確認(rèn)一下，然后送測(cè)序。

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5樓2019-07-01 08:10:01

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