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藍(lán)兔2209新蟲 (初入文壇)
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[求助]
蛋白純化 已有1人參與
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我最近在表達(dá)白蛋白 ，遇到了些困難，求助大家，蛋白一過柱就開始結(jié)晶，出現(xiàn)絮狀物，以下是我的步驟，不知道什么原因，請大家?guī)臀曳治鱿?、在250ml培養(yǎng)基加入IPTG誘導(dǎo)3小時后，5500g，離心20min后，收集菌體沉淀 2、10mlPBS+ 8ul的溶菌酶溶解菌體，室溫放置3小時 3、超聲裂解菌體：強(qiáng)度70%，超聲30分鐘，冰上操作 4、離心，12000rpm，20分鐘 5、棄上清（A），收集沉淀，放入-80°（包涵體表達(dá)） 6、從-80°冰箱取出菌體，加入5ml的裂解液，室溫放置3小時 7、離心，12000rpm，離心20min，收集上清，用0.22um過濾器過濾，得到上清（B） 再次去過柱，發(fā)現(xiàn)依然很多結(jié)晶，之后沒有繼續(xù)操作。我純化蛋白卡在上柱這一步，后面的洗液還沒用到，因此我分析原因，是我蛋白樣品的問題，即與鎳柱接觸后，開始結(jié)晶析出。上清（B）與上清（A）相比，顏色稍黃，出現(xiàn)了少量氣泡，是否與此有關(guān)？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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2樓2019-06-23 20:45:03
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