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起名真難、新蟲 (初入文壇)
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[求助]
重組子轉(zhuǎn)入BL21(DE3)后涂板挑菌做菌液PCR沒有條帶
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我的具體情況是這樣的：重組子經(jīng)測序正確后，轉(zhuǎn)入BL21(DE3)，然后涂板挑了4個(gè)單菌落，我用其中的一個(gè)做了一次常溫表達(dá)，結(jié)果所有時(shí)間梯度（之前實(shí)驗(yàn)已經(jīng)確定最適iptg濃度）都沒有目的條帶，并且超聲破碎后也沒有發(fā)現(xiàn)目的條帶，后面就做了一次菌液pcr鑒定，結(jié)果陰性對照沒有條帶，還有兩個(gè)菌落樣品也沒有條帶（包括用來做表達(dá)的樣品）。 我疑惑的就是重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化，怎么會出現(xiàn)沒有目的基因的抗性菌落？并且我做表達(dá)的時(shí)候，未誘導(dǎo)的一組在目的蛋白的位置出現(xiàn)了一條帶，其他組卻沒有，這又是為什么？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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