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HL-60細(xì)胞轉(zhuǎn)染后進(jìn)行G418篩選 已有2人參與
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| HL-60細(xì)胞轉(zhuǎn)染培養(yǎng)4-6小時(shí)后，需要向培養(yǎng)瓶中加入含血清的培養(yǎng)基還是先去除原來的不含血清的培養(yǎng)基，再加入含血清及雙抗的培養(yǎng)基？請(qǐng)問轉(zhuǎn)染后G418的篩選濃度多少最為適宜應(yīng)為多少？ |
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| 由于基因轉(zhuǎn)染到細(xì)胞到細(xì)胞內(nèi)之后要一段時(shí)間才能表達(dá)出蛋白質(zhì)。所以篩選不能太早，但也不能太晚，因?yàn)檗D(zhuǎn)染了外援基因的細(xì)胞代謝負(fù)荷較大，增值較慢，時(shí)間長(zhǎng)了就會(huì)被沒有外源基因轉(zhuǎn)入的細(xì)胞所淹沒，最終導(dǎo)致篩選不出陽性克隆，我們實(shí)驗(yàn)室一般在RFect-siRNA轉(zhuǎn)染24h后才開始加G418篩選。隨著下包的代謝G418的濃度和活性都會(huì)下降，所以每3-5天都需要更換一次含有G418的篩選液，這是藥物濃度可以降至200ug/ml |
3樓2019-04-26 16:56:30
zzh5550965
新蟲 (小有名氣)
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- 專業(yè): 細(xì)胞生物學(xué)
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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去吸掉不含血清的培養(yǎng)基，再加入含血清的培養(yǎng)基，這個(gè)根據(jù)藥殺的最佳濃度，查文獻(xiàn)，或者自己去試試 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2019-04-26 15:44:41
junjieshao
禁蟲 (小有名氣)
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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4樓2019-04-27 04:09:49
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