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不完美的m新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
藍(lán)白斑篩選出現(xiàn)非菌落的藍(lán)色東西
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| 本人小白，請(qǐng)教一下各位大神，最近在做分子克隆。在進(jìn)行藍(lán)白斑篩選的時(shí)候平板上出現(xiàn)了很小很小的藍(lán)色的東西，白色的一個(gè)都沒(méi)有，我想問(wèn)下，那個(gè)藍(lán)色的是什么東西？為什么會(huì)出現(xiàn)這種情況呢？注：1、我所克隆的分子片段2500左右，PCR產(chǎn)物回收后跑膠驗(yàn)證條帶正常。2、按照PCR的體系（沒(méi)有加引物，使用Taq DNApoly酶，沒(méi)有dATP，用的dNTP代替的），72℃，反應(yīng)10min。加A尾巴。之前也是這么做的。3、接著做連接（使用T-Vector。DH5a。按照標(biāo)準(zhǔn)操作進(jìn)行的).涂板第二天出現(xiàn)藍(lán)色東西，感覺(jué)菌落一個(gè)都沒(méi)有長(zhǎng)出來(lái)。不知道是什么東西，更不知道什么原因。求教！ |
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請(qǐng)教各位
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3樓2019-05-23 10:25:37
f?h?j?nv?h
新蟲(chóng) (小有名氣)
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2樓2019-05-17 09:13:05
黑暗微光
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西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2019-05-25 22:49:30
西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2019-05-25 22:49:30
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我最近也在做藍(lán)白斑篩選，一般藍(lán)斑表示非重組載體而白斑才是我們要的，白色的菌沒(méi)有，可能是連接試劑盒有問(wèn)題，用連接試劑盒給的那個(gè)DNA去試一下，看有沒(méi)有白色菌落，如果有，說(shuō)明你的模板有問(wèn)題，如果沒(méi)有白色菌落，那就是你的試劑盒有問(wèn)題。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
4樓2019-05-23 10:50:38
黑暗微光
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西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2019-05-25 22:49:45
西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2019-05-25 22:49:45
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補(bǔ)充下，就算是白色的，也不一定就是你想要的，可能有小片段的DNA也插入到了載體上，破壞了那個(gè)β-半乳糖苷酶的閱讀框架，導(dǎo)致菌落呈現(xiàn)白色菌落。 而有時(shí)候藍(lán)色菌進(jìn)行快速pcr檢測(cè)的時(shí)候，同樣也可以p出來(lái)，可能是前段插入了，但是沒(méi)有破壞閱讀框架 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
5樓2019-05-23 10:54:30
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