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細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率低的原因
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轉(zhuǎn)染效率低的原因可從以下幾方面找： 1.質(zhì)粒DNA或混和液中含有血清。 對策：用無血清培養(yǎng)基或Opti-MEM培養(yǎng)基。 2.質(zhì)粒DNA和轉(zhuǎn)染試劑的比率不是最優(yōu) 對策：對大多數(shù)細(xì)胞而言，質(zhì)粒DNA和轉(zhuǎn)染試劑的比例為1:2-1:3，一般要做優(yōu)化實驗，比例從1:0.5-1:5 逐一檢測。 3.質(zhì)粒DNA 已部分降解或質(zhì)量不夠好 對策：用好的質(zhì)粒純化試劑確保質(zhì)粒DNA質(zhì)量，正確保存，確保質(zhì)粒DNA不被降解。 4.轉(zhuǎn)染試劑選擇不當(dāng)。建議選用效率高，毒性低的轉(zhuǎn)染試劑，比如Entranster試劑。 5.細(xì)胞密度不是最優(yōu)，優(yōu)化細(xì)胞密度。 6.混和加入細(xì)胞中不含血清。在轉(zhuǎn)染過程中使用含有血清的培養(yǎng)基，細(xì)胞狀態(tài)良好有利于轉(zhuǎn)染效率的提高。 7 .轉(zhuǎn)染體系中含有抑制物 轉(zhuǎn)染體系中不應(yīng)包含EDTA、檸檬酸、磷酸鹽、RPMI、硫酸軟骨素、透明質(zhì)酸酶、硫酸葡萄糖聚酶及硫酸化蛋白聚糖 8.檢驗轉(zhuǎn)染效率及表達(dá)的方法有問題 使用報告基因來檢測轉(zhuǎn)染效率，報告基因使你確定目標(biāo)基因的表達(dá) 9.啟動子及增強子不被包裝細(xì)胞識別。確認(rèn)你構(gòu)建質(zhì)粒上的啟動子增強子與靶細(xì)胞相容。 10.轉(zhuǎn)染試劑保存不正確，轉(zhuǎn)染試劑保存在4℃。 |
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