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星庭光耀新蟲 (初入文壇)
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[求助]
overlap pcr具體過程
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最近要合成一個(gè)126bp的基因，直接用引物合成不添加模板，老板說用overlap pcr合成。已經(jīng)設(shè)計(jì)了一對(duì)引物，但是后面用的pcr溫度，循環(huán)數(shù)，酶什么的，保存啊一頭霧水（研一剛接觸這么東西所以）。有可以給我說說后面具體該怎么操作的大神？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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ideacolin
新蟲 (初入文壇)
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星庭光耀(淵博震天代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)積極回帖 2019-03-27 18:27:00
星庭光耀(淵博震天代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)積極回帖 2019-03-27 18:27:00
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兩條引物中間得有同源序列，所以得合兩條大引物，或者三條小引物，退火的時(shí)候彼此在末端anneal上，三條引物用退火的方式連接在一起，這樣經(jīng)過PCR反應(yīng)就能得到一條大的片段，條件跟普通pcr差不多。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2019-03-27 13:28:10
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