 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 665 | 回復(fù): 0 | |||
[交流]
siRNA轉(zhuǎn)染常見問題及解答
|
|
問：siRNA導(dǎo)入細(xì)胞有哪些方法，哪種最好？ 答：siRNA導(dǎo)入細(xì)胞有以下幾種方法：化學(xué)轉(zhuǎn)染技術(shù)、電穿孔法、磷酸鈣共沉淀技術(shù)、顯微注射和載體導(dǎo)入技術(shù)。選擇時應(yīng)該依據(jù)實(shí)驗(yàn)條件考慮以下因素：細(xì)胞對轉(zhuǎn)入方式的承受能力、細(xì)胞對病毒侵染的易感性、細(xì)胞的生長特性等。對貼壁細(xì)胞來說化學(xué)轉(zhuǎn)染技術(shù)是最為常用的方法，而對懸浮細(xì)胞則采用電穿孔法效果較好。 問：哪種轉(zhuǎn)染試劑效果好？ 答：在選擇轉(zhuǎn)染試劑時，一般要考慮的是特定的細(xì)胞株，而不是被導(dǎo)入細(xì)胞中的物質(zhì)。脂質(zhì)體試劑的毒性較大，建議選擇非脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染試劑，如Entranster試劑。 問：如何篩選轉(zhuǎn)染試劑？ 答：好的轉(zhuǎn)染試劑有以下特點(diǎn)：1、對siRNA有較高的轉(zhuǎn)染率；2、對細(xì)胞的毒性小。在mRNA水平檢測siRNA導(dǎo)入的效果比用看家基因的siRNA陽性對照檢測更為準(zhǔn)確。 問：在轉(zhuǎn)染時我發(fā)現(xiàn)有不少細(xì)胞死亡，應(yīng)該如何處理？ 答：轉(zhuǎn)染后大多數(shù)細(xì)胞死亡表明：轉(zhuǎn)染條件需要進(jìn)一步地優(yōu)化。在優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件時需要考慮以下因素：轉(zhuǎn)染試劑和細(xì)胞特有的自身?xiàng)l件。例如：siRNA與轉(zhuǎn)染試劑的比例、轉(zhuǎn)染時間、細(xì)胞傳代數(shù)和細(xì)胞密度等。 問：對于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，應(yīng)該如何提高其轉(zhuǎn)染效率？轉(zhuǎn)染效率又該如何確定？ 答：對于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞的轉(zhuǎn)染，如何提高轉(zhuǎn)染效率的問題也是目前研究的技術(shù)難題。一般建議使用電轉(zhuǎn)的方法，但是由于電轉(zhuǎn)的方法對細(xì)胞損傷比較大，該方法也未必是最佳的。轉(zhuǎn)染效率的確定，常用的是使用熒光標(biāo)記的siRNA，通過熒光顯微鏡，共聚焦顯微鏡，流式細(xì)胞儀檢測的方法。 問：轉(zhuǎn)染后出現(xiàn)細(xì)胞死亡是什么原因？如何優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件？ 答：轉(zhuǎn)染后細(xì)胞死亡，原因也是多樣的，如脂質(zhì)體毒性，轉(zhuǎn)染濃度過高，轉(zhuǎn)染前的細(xì)胞狀態(tài)不佳等都可能導(dǎo)致轉(zhuǎn)染后細(xì)胞死亡的情況發(fā)生，這種情況下就需要適當(dāng)優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件；可以選擇細(xì)胞毒性小的非脂質(zhì)體類的轉(zhuǎn)染試劑，如Entranster試劑，另外，如果siRNA所靶向的基因?qū)τ诰S持細(xì)胞生長是非常重要的，出現(xiàn)細(xì)胞死亡的現(xiàn)象可能正是由于基因干擾引起的，如果由于細(xì)胞死亡而影響檢測的話，可以適當(dāng)調(diào)整檢測時間。實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化，包括轉(zhuǎn)染前細(xì)胞密度調(diào)整，轉(zhuǎn)染濃度，檢測時間等。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有277人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 書畫江湖 的主題更新
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 085600材料與化工，一志愿廣州985，求調(diào)劑 +8 | qqyyaill 2026-03-05 | 8/400 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 求材料調(diào)劑 +4 | berdmond 2026-03-05 | 4/200 |
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +4 | 曼殊2266 2026-03-05 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0856材料與化工求調(diào)劑！ +5 | 化工考生111 2026-03-04 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 一志愿985材料與化工 326分求調(diào)劑 +3 | Hz795795 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 322分 085600求調(diào)劑，有互聯(lián)網(wǎng)+國金及主持省級大創(chuàng)經(jīng)歷 +6 | 熊境喆 2026-03-04 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué) 一志愿東北大學(xué) 279分求調(diào)劑 +4 | 聶樂平 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 能動297求調(diào)劑，本科川大 +4 | 邵11 2026-03-04 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085601 材料305分求助 +4 | 泡泡郵件 2026-03-03 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 322,求調(diào)劑 +3 | 菜菜愛玩 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考博] 26申博-目前4篇SCI一作 +3 | chen_2024 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 復(fù)試調(diào)劑 +4 | 杰尼龜aaa 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑一志愿中海洋 +3 | lour. 2026-03-03 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 化工270求調(diào)劑 +10 | 什么名字qwq 2026-03-02 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 284求調(diào)劑 +6 | 天下熯 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[論文投稿]
通訊作者寫誰，問題是你意想不到的問題
 15+3
|
阿爾法啊 2026-03-01 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑。一志愿報考鄭州大學(xué)化學(xué)工藝學(xué)碩，總分295分 +8 | yl1 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 284求調(diào)劑 +10 | 天下熯 2026-02-28 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +3 | Y墨明棋妙Y 2026-02-28 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +3 | 52hz~~ 2026-02-28 | 5/250 |
|