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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 生物科學 » 細胞科學 » RNA轉染實驗的影響因素
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[交流]
RNA轉染實驗的影響因素
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1. 轉染試劑 轉染中要額外注意的就是轉染試劑應該是確認無RNase污染的，而且也盡量避免和質粒DNA轉染混用——即使試劑本身兼容DNA和RNA轉染，因RNA與DNA大小不同，轉染條件不同，所需的試劑也應不同，所以RNA專用的轉染試劑會更好一些。比如Entranster試劑. 2. RNA轉染時RNA的用量 RNA轉染的用量必須參考RNA轉染試劑說明，因為RNA和轉染試劑的比例決定了轉染復合物的結構和凈電荷，以及是否容易被細胞膜吸附和內(nèi)吞。RNA少了固然表達不好，太多也會有毒性的問題。 3. RNA本身的結構 除了操作，RNA本身的結構也對轉染有一定的影響。哺乳動物的mRNA分子帶有5'端帽子結構和3'端PolyA尾巴，此外還有成為IRES(internal ribosomal entry site)的核糖體結合區(qū)，這些結構或者有助于提高mRNA的穩(wěn)定性，或者有助于核糖體結合到mRNA上進行翻譯。 |
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