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駱駝和小丫頭新蟲 (初入文壇)
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[求助]
載體連接轉(zhuǎn)化，單菌落搖不起來(lái)，求大神指點(diǎn)！ 已有1人參與
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自己做的載體連接，Pet28a先酶切以后，連接目的片段。轉(zhuǎn)化至DH5α里面，涂LB平板（加卡那霉素），兩天才長(zhǎng)出來(lái)幾十個(gè)小點(diǎn)點(diǎn)，大的菌落不超過(guò)10個(gè)。 挑取大的單菌落，接種至LB液體培養(yǎng)基里，37℃搖了一夜加一天，培養(yǎng)基還是澄清的。第一次做構(gòu)建載體，懵逼的很，希望大神指點(diǎn)～ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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2樓2019-03-20 14:45:29
3樓2019-03-20 14:47:34
駱駝和小丫頭
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 25.5
- 帖子: 15
- 在線: 1.7小時(shí)
- 蟲號(hào): 14359230
- 注冊(cè): 2019-02-25
- 專業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子
送紅花一朵 |
對(duì)的，我搖菌3天長(zhǎng)出來(lái)OD值不到0.4，拿菌液破碎后為模板，做PCR，然后出現(xiàn)一個(gè)條帶為600bp左右，也不是插入的片段長(zhǎng)度（插入片段為510bp），正常的話用通用引物p出的條帶應(yīng)該為800—1000bp左右。嚴(yán)重懷疑載體連接失敗，可是失敗了怎么能長(zhǎng)出菌呢？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2019-03-22 19:44:16
5樓2019-03-22 20:39:34
6樓2019-03-22 20:40:39
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