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細(xì)胞實(shí)驗重復(fù)性差？先看看有沒有支原體污染
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當(dāng)實(shí)驗結(jié)果與預(yù)期不一致或無法重復(fù)時，先自查——查一下自己的研究樣本，特別是細(xì)胞培養(yǎng)是否做到位了，其中有“一點(diǎn)”需特別注意，因顯微鏡下很難觀察到它，沒有視覺，就沒有感知，所以它很容易被忽略。 這“一點(diǎn)”就是：支原體污染！ 全世界范圍內(nèi)，不同實(shí)驗室的科研人員在培養(yǎng)細(xì)胞時，發(fā)生支原體污染的概率是10%-85%不等。支原體是最小的原核生物，大約0.2-0.3um, 可以透過濾膜(0.22-0.45 um)，因此被污染細(xì)胞常常肉眼觀察不到。有的實(shí)驗室被支原體污染后，如果不進(jìn)行有效徹底的支原體清除，該實(shí)驗的細(xì)胞培養(yǎng)很難進(jìn)行下去，細(xì)胞傳代3代以后狀態(tài)就急劇下滑，無法進(jìn)行正常實(shí)驗，有的實(shí)驗室甚至只能指望換細(xì)胞間。 大量文獻(xiàn)報道細(xì)胞支原體污染后，會影響DNA 、RNA 和蛋白的表達(dá)，進(jìn)而會產(chǎn)生以下幾個方面的影響： 1，細(xì)胞生長和繁殖 2，細(xì)胞代謝及功能 3，染色體異常 4，免疫細(xì)胞的質(zhì)量 如何與這害人的支原體做斗爭? 首先，可對細(xì)胞進(jìn)行支原體污染檢測，下面介紹3種方法： 1，PCR法。 若有污染，會P出條帶，如果不放心送去測序看看是不是支原體序列。記得那會實(shí)驗室每周有專人進(jìn)行全實(shí)驗室細(xì)胞的支原體檢測，一發(fā)現(xiàn)有問題，馬上將其扼殺在搖籃里。但是有時PCR法敏感性差容易出現(xiàn)假陰性結(jié)果，或是因為檢測范圍小不能檢測到所有的支原體污染。 2，Hoechst等熒光染色法和酶活法。 Hoechst等熒光染色法需要先將細(xì)胞種植在載玻片上，等細(xì)胞長到合適的密度，對其進(jìn)行固定、洗滌、染色等,最終在顯微鏡下的現(xiàn)象。酶活法是通過檢測支原體特異性ATP合成酶來檢測支原體的污染，需要特定的試劑盒和相應(yīng)的多功能酶標(biāo)儀，而且試劑盒的價格還比較昂貴。這兩種方法沒有做PCR 來得簡單快速。 3，基于先達(dá)基因ERA技術(shù)的支原體檢測試劑盒 ERA是由我國蘇州先達(dá)基因自主研發(fā)的，核心是一套等溫核酸擴(kuò)增組合酶制劑。該試劑盒可以在恒定的低溫下（25℃-42℃）對痕量的支原體種內(nèi)保守性DNA片段進(jìn)行特異性的擴(kuò)增，擴(kuò)增反應(yīng)可以在20min內(nèi)完成，該試劑盒檢測范圍涵蓋130種支原體。這可以說是目前最為理想的支原體檢測方法了。 。 然后，如果檢測到有支原體污染，該如何處理呢? 方法1：直接棄之！ 這就非常簡單粗暴了，如果還沒做處理，還是趕緊棄之吧，搶救不如重新復(fù)蘇了，另外對培養(yǎng)箱要做由里至外的清潔處理。 方法2：支原體清除培養(yǎng)基 如果你培養(yǎng)的細(xì)胞比較珍貴，直接丟棄可惜，那么在確定對細(xì)胞的基因及蛋白表達(dá)沒有影響的情況下，可以使用——支原體清除培養(yǎng)基 Procell支原體清除培養(yǎng)基 支原體清除培養(yǎng)基是Procell在市面上已有的 支原體清除培養(yǎng)基基礎(chǔ)上開發(fā)的新一代產(chǎn)品，含有清除“支原體”的特殊成分(一種混合制劑，可通過抑制DNA和支原體生長所必須的相關(guān)蛋白合成來取得良好的支原體清除效果，最大程度上挽救珍貴的細(xì)胞，減少因支原體污染帶來的損失)。 拯救被支原體污染的細(xì)胞，你們Get到了嗎? 支原體污染不易察覺，但染上卻可以毀了全部細(xì)胞。為了不讓自己輸在起跑線上，今后，請在蛋白檢測不順時，多注意下不易察覺的細(xì)節(jié)如支原體污染，細(xì)胞交叉污染，細(xì)胞傳代次數(shù)過多所導(dǎo)致的細(xì)胞老化，等等。做科研，細(xì)節(jié)決定成敗! |
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