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pesc-his和pesc-leu質(zhì)粒在釀酒酵母中的丟失問題
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| 我們在釀酒酵母中做crispr/cas9基因敲入，在p-416質(zhì)粒上表達cas9(低拷貝，URA篩選標(biāo)記)，在pesc-his表達了gRNA，成功之后想要把這兩個質(zhì)粒去掉，就在YPD培養(yǎng)過夜，涂布在FOA平板上，p-416的質(zhì)粒很容易丟失，但是pesc-his的質(zhì)粒有時很難去除掉，反復(fù)在YPD的培養(yǎng)基中培養(yǎng)也不行，按說這種游離的質(zhì)粒在天然培養(yǎng)基中很容易丟失才對。為了進一步促使pesc-his的丟失，我在該質(zhì)粒上表達了URA，并驗證可以表達，但是在FOA板上長出的菌株中仍然有攜帶pesc-his質(zhì)粒的，把pesc-his換成pesc-leu也會出現(xiàn)這種情況，我就很疑惑，請問各位大佬，這是怎么回事呢？謝謝。 |
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