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HL-60細(xì)胞轉(zhuǎn)染的相關(guān)問題
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| 準(zhǔn)備做HL-60的轉(zhuǎn)染試驗了，實驗室常用的的是lipofectamine 2000,但是聽說hepG2的轉(zhuǎn)染效率很低，請問哪種轉(zhuǎn)染方法更適合HL-60?需要改用電轉(zhuǎn)嗎？如果用lipofectamine 2000，加入的比例如何?請有經(jīng)驗的朋友告知詳細(xì)情況，謝謝！ |
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- 專業(yè): 微生物遺傳育種學(xué)
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HL-60細(xì)胞用lipo2000的轉(zhuǎn)染效率應(yīng)該是可以的，可以到70%左右，不需要用電轉(zhuǎn)，磷酸鈣法也可以有40－50％的 只是在操作上需要注意： 1，細(xì)胞鋪板時的狀態(tài)很重要，應(yīng)該在鋪板前盡量消化為單細(xì)胞懸液，trypsin＋EDTA充分吹打即可 2，轉(zhuǎn)染前1天鋪板，待轉(zhuǎn)染時密度剛好達(dá)到80－90％，不能太低，但是也不能長過（細(xì)胞成團(tuán)，堆積）。最好是剛剛長滿，此時還在對數(shù)生長期 3，加入的質(zhì)粒要去除內(nèi)毒素，plasmid:lipo約為1:0.5-1:5。實際上采用說明書的推薦量就很好，1：2.5 4，需要強(qiáng)調(diào)，lipo2000對細(xì)胞的毒性偏大，在轉(zhuǎn)染后需要及時更換培養(yǎng)液，也正是因為如此我們才更換了DeofectEU 5，用前自己好好看一遍說明書,最好做個預(yù)實驗 |
2樓2019-02-19 17:11:13
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