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RNA轉(zhuǎn)染影響因素
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1.轉(zhuǎn)染試劑 轉(zhuǎn)染中要額外注意的就是轉(zhuǎn)染試劑應(yīng)該是確認(rèn)無RNase污染的，而且也盡量避免和質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染混用—即使試劑本身兼容DNA和RNA轉(zhuǎn)染，因RNA與DNA大小不同，轉(zhuǎn)染條件不同，所需的試劑也應(yīng)不同，所以RNA專用的轉(zhuǎn)染試劑會更好一些。比如Entranster試劑. 2.RNA轉(zhuǎn)染時RNA的用量 RNA轉(zhuǎn)染的用量必須參考RNA轉(zhuǎn)染試劑說明，因?yàn)镽NA和轉(zhuǎn)染試劑的比例決定了轉(zhuǎn)染復(fù)合物的結(jié)構(gòu)和凈電荷，以及是否容易被細(xì)胞膜吸附和內(nèi)吞。RNA少了固然表達(dá)不好，太多也會有毒性的問題。 3.RNA本身的結(jié)構(gòu) 除了操作，RNA本身的結(jié)構(gòu)也對轉(zhuǎn)染有一定的影響。哺乳動物的mRNA分子帶有5'端帽子結(jié)構(gòu)和3'端PolyA尾巴，此外還有成為IRES(internalribosomal entry site)的核糖體結(jié)合區(qū)，這些結(jié)構(gòu)或者有助于提高mRNA的穩(wěn)定性，或者有助于核糖體結(jié)合到mRNA上進(jìn)行翻譯。 |
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