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tq0ax1r新蟲 (初入文壇)
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[求助]
目標(biāo)蛋白不能表達(dá)，求助！ 已有3人參與
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帖子發(fā)在另一個(gè)版沒人回答，不能在此發(fā)一模一樣的內(nèi)容，只好貼網(wǎng)址了 http://m.gaoyang168.com/t-13164895-1 請(qǐng)大家?guī)兔纯�，非常感謝！ |
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2樓2019-02-07 15:45:03
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3樓2019-02-13 07:21:48
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4樓2019-04-10 13:20:59
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【答案】應(yīng)助回帖
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西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2019-04-10 20:56:30
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2019-04-10 20:56:30
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表達(dá)的什么？可溶性蛋白還是膜蛋白還是別的什么產(chǎn)物？基因來(lái)源是什么，表達(dá)宿主是什么？ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
5樓2019-04-10 13:22:09
一個(gè)不小心就
金蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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不表達(dá)是很正常的。通常一次會(huì)做好多不同的克隆，運(yùn)氣好會(huì)得到一個(gè)比較理想的。 你可以換質(zhì)粒：pET28a, 28b, 32a, 60, etc. 同一個(gè)質(zhì)粒也可以試不同的酶切位點(diǎn)。 還不行就截短基因�；蛘叨噙B一個(gè)標(biāo)簽蛋白：His，SUMO等，這樣有一個(gè)好處，你可以western blot驗(yàn)證是否表達(dá)。 再不行就真核表達(dá)吧。 按理說(shuō)，既然自然界中有這個(gè)蛋白，就一定有辦法表達(dá)出來(lái)，你要做的就是找到一個(gè)合適的條件。 密碼子是肯定要優(yōu)化的。 表達(dá)條件可以先不管，我習(xí)慣是OD0.6， 20℃過(guò)夜誘導(dǎo)，0.4 mM IPTG。 表達(dá)條件一般只決定表達(dá)量的高低，不決定是否表達(dá)。 |
6樓2019-04-11 16:55:23
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